维普资讯 http://www.cqvip.com 西北药学杂志２００７年１２月 第２２卷第６期 １４种化学药品微生物限度检查方 法验证结果及分析 李惠娥，张 丹，由亚宁，周志云，崔玉锦（陕西省药品 检验所，陕西西安７１００６１） 号０５０７０１，２５ ｍｇ／袋）；Ｎｏ．１２来托司坦颗粒（西安 博华制药有限责任公司，批号０５０７０１，５０ ｍｇ／袋）； Ｎｏ．１３贝诺酯片（西安太极药业有限公司，批号 ０６０１０１，０．５８ ｇ／粒）；Ｎｏ．１４尼莫地平片（陕西省秦 光制药厂，批号０５０８０１，２０ ｍｇ／片）。 １．２培养基改良马丁培养基、营养肉汤培养基、营 养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、蛋白胨，均购于 摘要：目的 建立１４种化学药品的微生物限度检查方法。方 法采用人工污染５种试验菌株测定其回收率，验证是否有抑 茵作用。结果其中来托司坦颗粒（２５，５０ ｍｇ／袋）和尼莫地 中国药品生物制品检定所；稀释液：ｐＨ７．０氯化钠一 蛋白胨缓冲液；以上均参考文献 制备，采用高压蒸 平片３种供试品（Ｉ组）试验茵的回收率均高于７Ｏ ，无抑茵 作用；氯酚伪麻缓释片、氯雷他定口腔崩解片、来托司坦胶囊 （２５，５０ ｍｇ／粒）４种供试品（Ⅱ组）具有一定的抑菌作用；而草 酸艾司西酞普兰片、硝苯地平缓释胶囊、醋氯芬酸片、法莫替丁 口腔崩解片、酒石酸唑吡坦口腔崩解片（５，１０ ｍｇ／片）和贝诺酯 片７种供试品（ｆｌＩ组）有较强的抑茵作用。结论 Ｉ组供试品 采用常规法进行微生物限度检查；Ⅱ组供试品采用培养基稀 释法（Ｏ．２ ｍＬ／皿即１ ｍＬ加５皿）进行微生物限度检查；ｆｌＩ组 供试品采用离心薄膜过滤法进行微生物限度检查。 关键词：微生物限度检查；验证｝抑茵作用 中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２００７）０６—０３２５—０３ 依据规定ｎ 要求，供试品在该检验量、该检验条 件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以 忽略不计，以确认所采用的方法适合于供试品的微 生物限度检查。为了保证检验结果的准确、可靠及 检查方法的完整性，笔者加入金黄色葡萄球菌、大肠 埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌５种 试验菌于１４种化学药品中，对各试验菌的回收率进 行逐一验证。 １材料 １．１供试品 Ｎｏ．１草酸艾司西酞普兰片（西安杨 森制药有限公司，批号２０９３４４９，１０ ｍｇ／片）；Ｎｏ．２ 氯酚伪麻缓释片（西安利君制药有限责任公司，批 号０６０２０１，每片含氯雷他定２．５ ｍｇ、硫酸伪麻黄碱 ６０ ｍｇ、对乙酰氨基酚５００ ｍｇ）；Ｎｏ．３硝苯地平缓释 胶囊（西安德天药业股份有限公司，批号２００５１０２０， ２Ｏ ｍｇ／粒）；Ｎｏ．４醋氯芬酸片（东盛科技股份有限 公司西安制药厂，批号２００６０６０４０，５０ ｍｇ／片）；Ｎｏ．５ 法莫替丁口腔崩解片（陕西量子高科药业有限公司， 批号０５０８００１，２０ ｍｇ／片）；Ｎｏ．６氯雷他定口腔崩解 片（陕西量子高科药业有限公司，批号０５０８００１，１０ ｍｇ／片）；Ｎｏ．７酒石酸唑吡坦口腔崩解片（陕西量子 高科药业有限公司，批号０５０９０５００１，５ ｍｇ／片）；Ｎｏ． ８酒石酸唑吡坦口腔崩解片（陕西量子高科药业有 限公司，批号０５０９１０００１规格：１０ ｍｇ／片）；Ｎｏ．９来 托司坦胶囊（西安博华制药有限责任公司，批号 ０５０７０１，２５ ｍｇ／粒）；Ｎｏ．１０来托司坦胶囊（西安博 华制药有限责任公司，批号０５０７０１，５０ ｍｇ／粒）；Ｎｏ． 儿来托司坦颗粒（西安博华制药有限责任公司，批 汽灭菌法灭菌。 １．３试验用菌种金黄色葡萄球菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６ ００３］、 大肠埃希菌［－ＣＭＣＣ（Ｂ）４４ １０２］、枯草芽孢杆菌［－ＣＭＣＣ （Ｂ）６３ ５０１］、白色念珠菌［－ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００１］和黑曲霉菌 ［－ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ ００３］均来自中国医学细菌保藏中心。 ２方法与结果 ２．１ 试验菌株茵液的制备①取经３５℃培养１８～ ２４ ｈ的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆 菌肉汤液体培养物１ ｍＬ，加入９ ｍＬ ９ ｇ・Ｌ－ 氯化钠 溶液（ＮＳ）中，１Ｏ倍稀释制成５Ｏ～１００ ｃｆｕ／ｍＬ的菌 悬液做活菌计数备用。 ②取经２５℃培养２４～４８ ｈ的白色念珠菌改良 马丁液体培养物１ ｍＬ，加入９ ｍＬＮＳ，１０倍稀释，制 成５Ｏ～１００ ｃｆｕ／ｍＬ的菌悬液做活菌计数备用。 ③取经２５℃培养１周的黑曲霉斜面培养物，加 ＮＳ ３～５ ｍＬ，洗下孢子，转移至另一空管，标准比浊 管比浊后，取１ ｍＬ加入９ ｍＬ ＮＳ中，１Ｏ倍稀释制成 ５Ｏ～１００ ｃｆｕ／ｍＬ的孢子菌悬液做活菌计数备用。 ２．２供试液制备取样品１０ ｇ，加稀释液１００ ｍＬ， 制成质量浓度为１００ ｇ・Ｌ－ 的供试液。 ２．３ 常规法取２．２项下的供试液１ ｍＬ，分别加入 上述５种试验菌株５Ｏ～１００ ｃｆｕ，立即倾注１５～２Ｏ ｍＬ琼脂培养基中，平行制备两个平皿，待凝固后置 规定的温度培养２４～７２ ｈ，观察结果，计算菌落数 作为试验组，同法测定相应加入的实验菌数作为菌液 组、测定供试品本底菌数作为供试品对照组，按下列 公式计算其回收率，结果见表１。 试验组菌的回收率（ ）＝煎堕塑 堕 斋 螽蓦 ×１ｏｏ％ ２．４培养基稀释法采用加０．５，０．２和０．１ ｍＥ／皿 供试液，分别加入不同的试验菌株５Ｏ～１００ ｃｆｕ，照 ２．３项下试验进行，结果见表２～４。 ２．５ 离心薄膜过滤法 取１：１０的供试液１０ ｍＬ， 离心３～５ ｍｉｎ（５００ ｒ・ｍｉｎ－ ），取上清液１ ｍＬ加入 薄膜过滤器中，过滤后用ｐＨ７．０缓冲液３００～４００ ｍＬ进行冲洗。在最后一次冲洗液中加入５Ｏ～１００ ｃｆｕ试验菌株，过滤，取出薄膜贴于琼脂培养基上，平 行制备２皿，测定其菌落数，结果见表５。 维普资讯 http://www.cqvip.com ３２６ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ Ｕ ｎ Ｍ 西北药学杂志｝ｉ【 ２００７年１２月 第２２卷；＂ｎ ＿： ｝４● ● 第６期 ｌ ２ ０ ０９ ７船｝∞弛∞ ｉ 他ｉ佃０踮 ７ｉ８ ● Ｏ ｉ ● Ｏ ８ｉ９● ３● ５６ ｉ７ｉ ９ ■ Ｏ：｝；５● ● ● ５４１● ７ ● Ｏ ７３２ ６２．５ ７７．７ ０ ０ 跎 ６ ９ ０ ０ Ｏ ；舱 ０ ｉ舱Ｏ ｎ Ｏ 舳 ２：７６．１ ０ ８６．０ Ｏ ９１．６ ８４．６ ９１．６ ９６．８ ２３．９ １７．６ ６ｉ５５３．１ ● ９ ● ；２ ５７．４ ５２．５ ５４．３ ８● ● ● ｉ ４ ● ｌ ９６ｌ■ ９；３７ ３２．２ ４Ｏ．Ｏ １７．６ ２９．９ ７ １Ｏ８ ９Ｏ．８ ９２．７ ７ｉ４ ● ９７．５ ９Ｏ．１ ９３．４ ； ９■ 加０ ０Ｏ船４ ｉｎ ０ ｎ ；０ Ｏ 趴！Ｏ ∞０１４．２盯 １４．７ ０ ７ ９３Ｏ １Ｏ ；６２ ８６● ● ０ ９● ４９３■ Ｏ６ ８；４■ Ｏ ０ Ｏ ８６．６ ８５．４ １Ｏ０ ９７．４ ７３．５ ８１．８ ９８．８ ９８．７ １００ ９５．４ Ｏ８４．４ Ｏ７７．３ ９４．２ ８５．３ Ｏ３２．６ ３２．６ ３２．４ ２３．０ ２２．０ ２１．０ ２２．０ ６１．５ ４８．６ ５５．６ ５５．２ ９９．４ Ｏ● ９４．６ ９Ｏ．９４．７ Ｏ２ １ ● ● Ｏ ２Ｏ ｌ． ８７Ｏ● ９Ｏ．９ ９５．２ ７７．３ ８５．２ ９２．８ ６ ６■ ９２．３ ９Ｏ．２ ９１．８ ４ ８ Ｏ；：● ● Ｏ ４ｉ７ ● ８● ８４．８ ９１．２ ９２．１ ８９．４ ８２．３ ８１．６ ９８．４ ６ ９２．８ ９Ｏ．１ ９３．８ ３ ３２．６ ９Ｏ．９ ９５．２ ９４．８ ９３．６ ８１．８ ７２．２ ７８．７ ７７．６ Ｏ９２．８ ６ｉ ９２．３ ９Ｏ．２４ ■ １ ８ ９１．８ ● ６● Ｏ ２ Ｏ １ ８３．５ ９９．３ ８１．８ ８８．６ ８９．９ ９６．６ ８１．４ ８８．６ ８８．９ ６２．５ ５５．０ ４８．１ ５５．２ ７６．６ ７６．６ ９１．５ ８４．５ ８４．２ ９３．８ ９３．２ ９７．２ ９４．７ Ｏ３２．４ ７ ５ ８ ｉ ■ ３１．２ ３５．０：● ● ３２．９ Ｏ ７ ８ ２ ９Ｏ．５ ９７．４ ９２．７ ９５．２ ９５．１ ９４．４ ９４．３ ９８．１ ９５．６ ７９．６ ９９．０ ９３．７ ９Ｏ．８ １００ １０Ｏ ９７．４ ９８．９ ９８．８ ９２．７ ８７．６ ９６．３ ９２．２ ８４．３ ６ ｌ１０Ｏ ● ９Ｏ．６ ９１．６ ３ ０ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ ７６．８ ８１．７ ７３．４ ７７．３ ０ ０ ２０．４ ６．８ ５ ８０．Ｏ ９４．０ ８７．０ ８３．０ ８８．０ ９５．０ ９６．０ ９０．０ ９３．７ ９３．０ ７８● ２． ０ ９４．０ ８９．７ Ｏ ５ ４● ８ ｒ、ｖ ７● ７ ７ ６● Ｏ● 帅０ Ｏ ６ ｉ ７ ９Ｏ ■ Ｏ 趴 Ｏ Ｏ ０ ５ ６ ８ Ｏ ８ ５■ Ｏ 趴跎蝎 ８ ｉ Ｏ ８ Ｏ● Ｏ● 帅踮 ４ ２ ｉ 趴；呱０蛆；踮趴曲跎６ ０ ０ １帅０ ％ １ ２ ０ ｉ ｉ ¨ ８ １０ 曲趴 ｌ ∞０舳 他跎 ０ ０舳虬０帅 ｉ ｉ ｉ １ 丌∞ ｉ ０呱呱 峨０ 儿 蛇 ； ２６．３ ９．２ １４．９ １６．５ ０ ０ ０ ０ ４２．０ １４．８ １６．３ ２４．４ ２６．０ ８４．８ ７３．０ ６１．３ ８２．２ ８５．５ ９２．３ ８６．７ １０２．２ ９２．３ ８１．７ ９２．１ ９１．１ ８４．３ ８３．２ ８６．２ ● ■ １ｉｉ８ ● ２ｉ８ ● 维普资讯 http://www.cqvip.com 西北药学杂志２００７年１２月 第２２卷第６期 ３２７ ｌ 蛆 Ｏ ；１２● Ｚ６● ０１● ００ ３００ ４００ ３００ ３００ ３００ ３００ ３００ ∞ｉ９ ｉ；｝ ● ● ● ９６５● ８５．９ ８４．７ ９１．０ ８９．６ ８１．２ ７９．６ ５ 曲 ５ ；｝ｉ● ● ● ９０２● 叭 ０ ；；ｉ● ● ● ９５６● 虬＂ ９８８● ３讨论 ９ ●” ｉ ５ ０ 联磺甲氧苄啶胶囊微生物限度检查 方法的研究 董 良 ，徐 翔。，李 梅。，宋 莉 （１．延安市药品检验 所，陕西延安７１６０００；２．陕西省药品检验所，陕西西安 ７１００６１；３．西安利君精华药业有限责任公司，陕西西安 ７１００７７） ①从表１可知，来托司坦颗粒（２５，５０ ｍｇ／袋）和 ｌ 尼莫地平片３种供试品对５种试验菌的回收率均高 于７０ ，证明无抑菌作用，可采用常规法测定其细 ９８●００ 菌、霉菌及酵母菌数。硝苯地平缓释胶囊对５种试验 菌均有抑菌作用，回收率为０～１７ 。贝诺酯片对５ 种试验菌（除大肠埃希菌外）均有抑菌作用，草酸艾司 西酞普兰片对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色 念珠菌有抑菌作用，回收率分别为５６％，０和５４％。 醋氯芬酸片、法莫替丁口腔崩解片和氯雷他定口腔崩 ０ 摘要：目的建立联磺甲氧苄啶胶囊微生物限度检查方法。 方法 采用中和薄膜过滤法测定细菌数，平皿法测定霉菌及 解片对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌作用， 其活性依次减弱。来托司坦胶囊（２５，５０ ｍｇ／粒）对 白色念珠菌和黑曲霉菌均有抑菌作用，回收率分别为 ５５ ，３３ 和３ ，５ 。而氯酚伪麻缓释片仅对金黄 色葡萄球菌有抑菌作用，回收率为３０％。酒石酸唑 吡坦口腔崩解片（５，１０ ｍｇ／片）对枯草芽孢杆菌有抑 菌作用，回收率分别为２７％和３２ 。 ②表２～３结果证明，来托司坦胶囊（２５，５０ 酵母茵数。结果 中和薄膜过滤法能准确测定制剂中细菌 数，平皿法能准确测定霉菌和酵母茵数；采用中和薄膜过滤 法，用ｐＨ７．０氯化钠一蛋白胨缓冲液８００ ｍＬ分８次冲洗，能 有效消除抑茵作用。结论所建立的微生物限度检查方法可 用于联磺甲氧苄啶胶囊微生物限度检查。 关键词：联磺甲氧苄啶胶囊；微生物限度检查；中和薄膜过滤 法；平皿法 中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７【２００７）０６—０３２７—０２ 联磺甲氧苄啶胶囊主要成分为磺胺甲嗯唑、磺胺 嘧啶和甲氧苄啶。该复方制剂有协同抑菌或杀菌作 用，抗菌作用较单一组分增强［１］。中国药典２００５年 版二部［２］规定本品需进行微生物限度检查。笔者建 立了联磺甲氧苄啶胶囊微生物限度检查方法。 １仪器与材料 ｍｇ／粒）、氯酚伪麻缓释片和氯雷他定口腔崩解片采 用培养基稀释法（０．２ ｍＬ／皿即１ ｍＬ加５皿）进行微 生物限度检查。 ③表５结果表明，草酸艾司西酞普兰片、硝苯地 平缓释胶、醋氯芬酸片、法莫替丁口腔崩解片、酒石酸 唑吡坦口腔崩解片（５，１０ ｍｇ／片）和贝诺酯片采用离 心薄膜过滤法进行微生物限度检查。 ④从来托司坦颗粒（２５，５０ ｒａｇ／袋）、来托司坦胶 囊（２５，５０ ｍｇ／粒）和酒石酸唑吡坦口腔崩解片（５，１０ ｍｇ／片）的验证实验结果可知，对同品种而规格不同 的药品，采用规格较大的药品进行验证即可。 １．１仪器 ＨＴＹ一２０００集菌仪（杭州高得医疗器械 有限公司）；隔水式培养箱（上海一恒，ＬＲＨ一２５０）；真 菌培养箱（重庆万达，ＷＧＰ一６００）。 １．２供试品联磺甲氧苄啶胶囊（西安利君精华药 业有限责任公司生产，批号：２００６１１０１） １．３培养基 营养琼脂培养基（批号０６０４１３），改良 马丁液体培养基（批号０６０６１１），营养肉汤培养基（批号 ０４１２２１），玫瑰红钠琼脂培养基（批号０５０８２１），胆盐乳 参考文献： ［１］ 中国药典２００５年版［ｓ］．二部．２００５．附录ＸＶＡ９３￣１Ｏ１． ［２］ 中国药典２０００年版［ｓ］．二部．２００５．附录ＸＶＡ９２￣１Ｏ２． （收稿日期：２００７—０５—１５） 糖增菌液（批号０５０４０９），ｐＨ７．０氯化钠一蛋白胨（批号 ００６１０２６），均由北京三药科技开发公司生产。 １．４稀释液、冲洗液ｐＨ７．０氯化钠一蛋白胨缓冲液 （按中国药典２００５年版方法配制）。