基因工程试题库

给以下质粒载体pUC18/19划线处填上其中文含义。

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

在进行琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子从电场的 （正极；负极）向 极泳动，超螺环型的质粒分子比其开环构型泳动更 （快；慢）。

观察琼脂糖凝胶中的DNA分子带，常常以 染色后在 光下观察其荧光。 碱性磷酸酶主要有 和 两种，作用于DNA分子将其5’磷酸基团水解除去。 反转录酶的酶学活性主要有 ； 和 三种。

琼脂糖凝胶常用的浓度范围在 %— %之间，相应可以分离 Kb— Kb的DNA分子。 Southern吸印（Southern blot）是指针对 分子的杂交；Northern吸印是针对分子的杂交。

通常质粒载体可以克隆 Kb的DNA片断；插入型载体可以克隆 Kb的DNA片段；替换型载体可以克隆 Kb的DNA片段；Cosmid可以克隆 Kb的DNA片断。

琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，要观察到DNA条带，应加入 染色，它可以在光照射下发射荧光。 的浮力密度。

11. DNA自动测序将Sanger的双脱氧末端终止法与 技术结合起来，使DNA测序摆脱了对大量单链模版的依赖。 12. DNA化学自动合成反应进行的方向与DNA酶催化合成的反应方向 （一致；不同），是从 （5’ 3’；3’ 5’）。 13. 与T-DNA转移起重要作用的是其两端的各 bp的重复序列及位于Ti质粒上编码与T-DNA转移有关蛋白的 基因，而

与T-DNA上携带的基因关系不大。

构型，电泳迁移率前者 （大、小、等）于后者。

15. 载体在完成重组连接后，通过包装蛋白的离体包装形成噬菌体颗粒。在包装蛋白进行有效的包装时，要求DNA大小在 Kb

之间，而且两端有两个 位点。

16. 大肠杆菌质粒的复制起始于一复制的原点，用 表示，其复制是 （单向；双向）进行，大肠杆菌基因组DNA复制

是 （单向；双向）进行的。

17. 通常的电泳条件下，琼脂糖凝胶可以有效分离 Kb—— Kb的分子，如果采用电泳的方式，也可以分离更

大的DNA片断。

18. DNA的自动合成目前主要采用 法，自 端至 端方向进行。

19. 根据质粒在宿主中的拷贝数，细菌质粒可分为 质粒和 质粒。pUC质粒通过对复制原点进行突变，使其在

宿主中的拷贝数大大提高，因此它属 于 质粒。

20. 反转录酶可以以 （RNA，ssDNA，dsDNA）和（RNA，ssDNA，dsDNA）为模板合成DNA互补链，

同样也需要引物。

21. 植物基因工程常用的报告基因有： 、 、 、 等。

和从中分离某一克隆片断的期望概率。 活性。

方法进入细胞；粘粒载体重组分子通过 方式进入细胞中扩增。

10. 在采用超速密度梯度分离纯化质粒DNA时，在溶液中加入 ，使得质粒的浮力密度 （大、小、等）于基因组DNA

14. 从细菌中经小量制备的质粒分子经电泳分离后，同一种分子由于构型不同而常产生两条带纹，其中一条为 构型，另一条为

22. 构建基因文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-L/G]，说明文库的大小取决于 ；

23. 大肠杆菌DNA聚合酶I具有： ； 和 三种主要酶学活性。而Klenow酶则失去了

24. 在进行分子克隆时，质粒载体构建的重组分子通过 方法进入细胞中扩增；而噬菌体重组体通过

25. 与真核生物所有染色体一样，维持YAC（酵母人工染色体）在酵母细胞中的稳定性，YAC必须具有三个基本结构要素：分别

是 ； 和 。

26. 用冷的CaCl2处理对数生长期的大肠杆菌细胞，可诱导细胞进入称为 态的生理状态进行遗传转化。

27. 构建cDNA文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-1/n]，说明文库的大小取决于 和从中分离

某一克隆片断的期望概率。

三、问答题：

1． 在进行-互补筛选重组转化菌时，为什么要采用M15突变的大肠杆菌作为转化受体菌？ 2． 下图为pUC18质粒的结构简图，简述以pUC18为载体进行DNA片断克隆的全过程。

3． 在细菌宿主中表达外源蛋白，为何强调对表达基因进行？利用乳糖操纵子是怎样对下游基因的表达进行控制的？ 4． 以gt10构建的cDNA文库在扩增时，会出现混浊和清亮两种形式的噬斑，试解释这一现象的原理。 5． 细菌对噬菌体的和修饰现象在分子水平是如何发生的？有何生物学意义？ 6． 简述PCR自动DNA测序的过程和原理。

7． 要使一外源基因在大肠杆菌中表达出蛋白质产物，要经过哪些基因工程步骤？请逐步加以说明。 8． 怎样检测转基因植物中外源基因的存在和表达情况？列举两种方法。 9． 构建基因组文库时为什么要制备DNA随机片段？怎样制备DNA随机片段？ 10． 简述利用根癌农杆菌进行植物遗传转化时的主要步骤。 11． 你了解的基因工程的主要工具酶有哪些，请一一阐述其作用。

12． 什么是融合蛋白？为什么基因工程发酵生产外源蛋白时常以融合蛋白的形式生产出目标蛋白前体？ 13． 以gt11构建cDNA文库，包装的噬菌体感染大肠杆菌后形成蓝色和无色的两种噬斑，试解释其原因。

14． 进行DNA克隆时，外源DNA片段有哪些主要来源。如果你完成了一个特殊蛋白的氨基酸序列测定，怎样从其序列出发分离其相应

的基因。

15． Lac UV 5 突变体启动子不依赖CAP的正，其在基因工程中运用有何优势？ 16．简述PCR技术的原理和过程。

17．多种载体中都采用-互补的方式筛选重组子，简述利用-互补进行重组子筛选的过程和原理。

18．什么是表达型载体？为了方便进行克隆基因的表达以及表达产物的分离与纯化，在表达型载体上采用了那些设计？ 19．获得转基因植物可以采用哪些方法？选择其中一种方法详细说明其操作的过程。

20．以下是pBR322的结构图，如果利用Pst I性酶克隆一外源DNA片断，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？

21．说明Southern吸印（Southern blot）杂交的原理和方法。 22．如何从一个文库中筛选出携带目的基因的克隆？简述其过程。

23．如果DNA片断和载体间的粘性末端不能匹配，怎样实现这两种分子的重组连接？请提出至少两种方法。 24．经过PCR扩增获得了某一特定的DNA带，怎样利用T载体将其克隆下来？ 25．什么是转基因动物？试简要阐述两种获得转基因动物的方法？

26．什么是cDNA文库？欲构建水稻花药cDNA文库，简述构建该cDNA文库的基本步骤。

27．根据基因工程法利用大肠杆菌表达外源蛋白药物的过程和特点，试设计基因工程生产胰岛素的过程？

28．进行植物遗传转化主要有哪些常用方法？你认为哪种方法最为合理？为什么？ 29．什么是包涵体？当基因工程生产的蛋白质形成包涵体后应怎样进行下游的工作？ 30．怎样对一段给定序列的DNA分子运用PCR方法进行定点突变？ 31．大肠杆菌为什么能高效表达外源基因？ 32．大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？

33．目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？ 34．在进行大肠杆菌表达外源蛋白质时，启动子为何需要具有可控性？ 35．IPTG诱导Plac启动子的分子机制是什么？

36．在大肠杆菌中采用T7启动子表达外源基因产物时，为什么要选用大肠杆菌DE3作为表达菌株？ 37．Ti质粒的主要分子生物学特征是什么？ 38．Ti质粒诱导植物根部生瘤的机理是什么？

39．什么是动物反应器？将动物乳腺作为生物反应器的理由是什么？

四、综合思考题

1． 今通过显微注射的方法获得了转基因羊若干，怎样对转基因羊进行分子检测？试根据你所掌握的基因工程、分子生物学等知识，提出

实验方法对转入的外源基因在羊中的整合、基因的表达水平加以检测。

2． 你认为转基因生物会带来哪些潜在的危险性？对转基因生物进行安全性管理是否必要？ 3． 运用你所学习的基因工程知识，描述进行某一生物基因组计划应采取的具体实施步骤。

4． 性内切酶对DNA进行酶切时，哪些因素会影响酶切反应的效果？如果你分离的DNA酶切效果不佳，应该采取什么措施进行处理？ 5． 基因工程表达的蛋白易形成包涵体，而一些蛋白形成包涵体后的溶解与复性效率往往不高。运用你掌握的基因工程知识，提出一些基

因工程的措施，降低包涵体的形成。

6． 什么是密码子的偏好性？怎样纠正大肠杆菌对外源基因密码子的偏好性？

7． 试设计一个实验对下段约2Kb的DNA进行定点突变，将位于分子中部的A-T 转换成G-C。

五、选择题（单项选择，请在括号内填上相应的一个英文字母） 1．根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】 Ａ： 基因诱变； Ｂ： 分子克隆； Ｃ： DNA重组； Ｄ： 遗传工程； Ｅ： 基因无性繁殖。 2．生物工程的上游技术是【 】 Ａ： 基因工程及分离工程； Ｂ： 基因工程及发酵工程； Ｃ： 基因工程及酶工程； Ｄ： 基因工程及细胞工程； Ｅ： 基因工程及蛋白质工程。 3．基因工程作为一种技术诞生于【 】 Ａ： 上世纪 50 年代初； Ｂ： 上世纪 60 年代初； Ｃ： 上世纪 70 年代初； Ｄ： 上世纪 80 年代初； Ｅ： 上世纪 90 年代初。

4．利用基因工程实现分子克隆，是通过【 】 Ａ： 基因定向重排； Ｂ： 强化启动基因； Ｃ： 增强子重组；

5 3

A T 3 5

Ｄ： SD 顺序的存在； Ｅ： 载体自主复制。

5．第一个由基因工程大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【 】 Ａ： 生长激素（Growth hormone）； Ｂ： 胰岛素（Insulin）； Ｃ： 干扰素（Interferon）；

Ｄ： 白细胞间溶菌素（Interleukin）； Ｅ： 生长激素释放抑制素（Somatostatin）。 6．下列有关基因的叙述，错误的是【 】 Ａ： 蛋白质是基因表达的唯一产物；

Ｂ： 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段； Ｃ： 基因也可以是 RNA；

Ｄ： 基因突变不一定导致其表达产物改变结构； Ｅ： 基因具有方向性。

7．性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 Ａ： 修复自身的遗传缺陷； Ｂ： 促进自身的基因重组； Ｃ： 强化自身的核酸代谢； Ｄ： 提高自身的防御能力； Ｅ： 补充自身的核苷酸消耗。

8．天然 PstI 性内切酶的来源是【 】 Ａ： Bacillus amyloliquefaciens； Ｂ： Escherichia coli； Ｃ： Haemophilus influenzae； Ｄ： Providencia stuartii； Ｅ： Streptomyces lividans。

9．下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是【 】 Ａ： GAAACTGCTTTGAC； Ｂ： GAAACTGGAAACTG； Ｃ： GAAACTGGTCAAAG； Ｄ： GAAACTGCAGTTTC； Ｅ： GAAACTGCAGAAAG。

10．下列五个 DNA 片段，最可能含有II型性内切酶 SstI 酶切位点的是 【 】 Ａ： GGAGAGCTCT； Ｂ： GAGCACATCT； Ｃ： CCCTGTGGGA； Ｄ： ATCCTACATG； Ｅ： AACCTTGGAA。

11．T 4 -DNA 连接酶催化相邻的两核苷酸通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是 【 】 Ａ： 2' -OH 和 5' -P； Ｂ： 2' -OH 和 3' –P； Ｃ： 3' -OH 和 2' -P； Ｄ： 3' -OH 和 5' -P； Ｅ： 5' -OH 和 3' –P。

12．核酸酶S1工具酶是一种【 】 Ａ： 只切双链 DNA 的水解酶； Ｂ： 只切单链 DNA的水解酶； Ｃ： 只切单链RNA的水解酶； Ｄ： 双链、单链 RNA 均切的外切酶；

Ｅ： 优先切单链但也可以切双链DNA及RNA的核酸酶。

13．下列有关连接反应的叙述，错误的是 【 】 Ａ： 连接反应的最佳温度为 37 ℃；

Ｂ： 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%； Ｃ： 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM； Ｄ： 连接酶通常应过量 2-5 倍； Ｅ： DTT 可以维持连接酶的结构。 14．提高重组率的方法包括 【 】

I： 加大外源 DNA 与载体的分子之比；II： 载体分子除5端磷酸基；III： 连接酶过量；IV 延长连接反应时间 Ａ： I + II； Ｂ： I + II + III； Ｃ： I + III + IV； Ｄ： II + III + IV； Ｅ： I + II + III + IV。 15．载体的功能是 【 】

I：运送外源基因高效进入受体细胞；II：为外源基因提供复制能力；III：为外源基因提供整合能力。 Ａ： I； Ｂ： I + II； Ｃ： I + III； Ｄ： II + III； Ｅ： I + II + III。

16．下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】 Ａ： 质粒是共价环状的双链 DNA 分子；

Ｂ： 天然质粒一般不含有性内切酶的识别序列； Ｃ： 质粒在宿主细胞内能于染色体 DNA 自主复制； Ｄ： 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增； Ｅ： 质粒并非其宿主细胞生长所必需。 17．带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 Ａ： 穿梭质粒； Ｂ： 表达质粒； Ｃ： 探针质粒； Ｄ： 整合质粒； Ｅ： 多拷贝质粒。

18．多聚接头（ Polylinker ）指的是【 】

Ａ： 含有多种性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段； Ｂ： 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段； Ｃ： 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段； Ｄ： 含有多种启动基因的人工 DNA 片段； Ｅ： 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段。

19．-DNA 体外包装的上下限是天然 -DNA 长度的 【 】 Ａ： 25 - 50 % ； Ｂ： 50 - 100 %； Ｃ： 75 - 100 %； Ｄ： 75 - 105 %； Ｅ： 100 - 125 %。

20．考斯质粒（cosmid）是一种【 】 Ａ： 天然质粒载体；

Ｂ： 由-DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体； Ｃ： 能裂解受体细胞的烈性载体； Ｄ： 具有溶原性质的载体；

Ｅ： 能在受体细胞内复制并包装的载体。

21．下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】 Ａ： Cosmid >-DNA > Plasmid； Ｂ： -DNA > Cosmid > Plasmid； Ｃ： Plasmid >-DNA > Cosmid； Ｄ： Cosmid > Plasmid > -DNA； Ｅ： -DNA > Plasmid > Cosmid。

22．目前在植物基因工程中广泛使用的载体是 【 】 Ａ： 质粒 DNA； Ｂ： 噬菌体 DNA； Ｃ： 病毒 DNA； Ｄ： 线粒体 DNA； Ｅ： 叶绿体 DNA。

23． 促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为 【 】 Ａ： 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用； Ｂ： 人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定；

Ｃ： 大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活； Ｄ： 人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感； Ｅ： 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化。 24．克隆菌扩增的目的是 【 】

I： 增殖外源基因拷贝； II： 表达标记基因； III： 表达外源基因。 Ａ： I； Ｂ： I + II； Ｃ： I + III； Ｄ： II + III； Ｅ： I + II + III。

25．载体质粒 pBR322 共有两个选择性标记： Ap r 、 Tc r。它们分别含有一个单一酶切位点： Pst I 、 Sph I。若将一外源基因插入Ap r中的Pst I位点，那么用于转化子和重组子筛选的抗生素使用方法应是 【 】 Ａ： 只在Ap上筛选； Ｂ： 只在Tc上筛选；

Ｃ： 先在Ap上筛选，阳性菌再接种到Tc上； Ｄ： 先在Tc上筛选，阳性菌再接种到Ap上； Ｅ： Ap + Tc上一次性筛选。

26．若某质粒带有互补的 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入显色底物为【 】 Ａ： 半乳糖； Ｂ： 葡萄糖； Ｃ： 蔗糖；

Ｄ： 5-溴-4-氯-3-吲哚基- -D-半乳糖苷（ X-gal ）； Ｅ： 异丙基巯基--半乳糖苷（ IPTG ）。

27．下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是 【 】 Ａ： ts； Ｂ： Ap r； Ｃ： lac Z ； Ｄ： Tc r； Ｅ： Trp –。

28．下列各组专业术语中，含义最为接近的是 【 】 Ａ： 终止子与终止密码子； Ｂ： 基因表达与基因重组； Ｃ： DNA 退火与 DNA 复性； Ｄ： 转化与转染； Ｅ： 重组子与转化子。

29．核酸分子杂交的化学原理是形成 【 】 Ａ： 共价键； Ｂ： 离子键； Ｃ： 疏水键； Ｄ： 配位键； Ｅ： 氢键。

30．下列三种探针同位素标记法中，必须使用- 32 P-dNTP 的是 【 】 Ａ： 缺口平移标记； Ｂ： DNA 5 末端激酶标记； Ｃ： 反转录标记； Ｄ： 随机引物标记； Ｅ： DNA 3 标记。

31．Subcloning（亚克隆） 法一般用于 【 】 Ａ： 基因杂交； Ｂ： 基因作图； Ｃ： 基因表达； Ｄ： 基因； Ｅ： 基因诱变。

32．双脱氧末端终止法测定 DNA 序列是基于 【 】 Ａ： DNA 的聚合反应； Ｂ： DNA 的连接反应； Ｃ： DNA 的降解反应； Ｄ： 特殊的 DNA 连接酶； Ｅ： 聚合单体 2' 和 5' 位的脱氧。

33．多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。为克隆其基因，最快速有效的筛选方法是 【 】 Ａ： 噬菌斑模型； Ｂ： 透明圈模型； Ｃ： 颜色反应模型； Ｄ： 免疫杂交模型； Ｅ： 凝胶电泳模型。

34．下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是 【 】 I：性酶切；II：PCR 扩增；III：抗药性筛选。 Ａ： I； Ｂ： I + II； Ｃ： I + III； Ｄ： II + III； Ｅ： I + II + III。

35．下列能区分期望重组子的筛选方法是 【 】 Ａ： 抗药性 筛选法； Ｂ： 营养缺陷 筛选法； Ｃ： 显色 筛选法； Ｄ： 次级克隆法； Ｅ： 菌落原位杂交法。

36．鸟法克隆目的基因的战略适用于 【 】 Ａ： 原核细菌； Ｂ： 酵母菌； Ｃ： 丝状真菌； Ｄ： 植物； Ｅ： 人类。

37．鸟法克隆目的基因的第一步是随机或非随机切割外源 DNA ，其方法有 【 】

I：超声波处理；II：酶解；III：机械搅拌。 Ａ： III； Ｂ： I + II； Ｃ： I + III； Ｄ： II + III； Ｅ： I + II + III。

38．mRNA 分离纯化技术的关键是【 】 Ａ： 细胞的温和破碎；

Ｂ： 分离系统中不得含有痕量的 SDS； Ｃ： 高离子强度缓冲液的使用； Ｄ： 密度梯度超离心； Ｅ： 严防核酸酶的降解。

39．cDNA 第一链合成所需的引物是 【 】 Ａ： Poly A； Ｂ： Poly C； Ｃ： Poly G； Ｄ： Poly T； Ｅ： 发夹结构。

40．离体cDNA 合成中所涉及的三种工具酶是 【 】

I：性内切酶；II：Klenow 聚合酶； III：RNase H；IV：Bal31 核酸酶；V：反转录酶。 Ａ： I + II + III； Ｂ： I + III + IV； Ｃ： II + III + IV； Ｄ： II + III + V； Ｅ： III + IV + V。

41．cDNA 法获得目的基因的优点是【 】 Ａ： 成功率高； Ｂ： 不含内含子； Ｃ： 操作简便； Ｄ： 表达产物可以分泌； Ｅ： 能纠正密码子的偏爱性。

42．Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，这是因为 【 】 Ａ：Taq DNA 聚合酶能有效地变性基因扩增产物； Ｂ：Taq DNA 聚合酶催化的聚和反应不需要引物； Ｃ：Taq DNA 聚合酶具有极强的聚和活性；

Ｄ：Taq DNA 聚合酶能耐受高温，使多轮扩增反应连续化； Ｅ：Taq DNA 聚合酶能使扩增反应在 DNA 变性条件下进行。

43．为了利用 PCR 技术扩增下列染色体 DNA 片段上的部分区段，从下列四种寡核苷酸中应选用的一对引物是 【 】

Ａ：I + II； Ｂ：I + III； Ｃ：I + IV； Ｄ：II + III；

Ｅ：II + IV。

44．基因工程中采用人工合成目的基因战略的主要原因是 【 】 Ａ：便于目的基因的分离纯化； Ｂ：便于目的基因的高效表达； Ｃ：便于目的基因的重组克隆； Ｄ：便于目的基因的顺序测定； Ｅ：便于目的基因的大量扩增。

45．人工合成 DNA 的是一个自动循环反应过程，除了每一步对固相柱进行洗涤外，主要包括下列顺序的反应步骤 【 】 I：乙酰化盖帽反应； II：缩合反应；III：去DMT保护基团；IV：氧化反应。 Ａ：I  IIIIIIV； Ｂ：II IIIIV I； Ｃ：IIIIIIV I； Ｄ：IIIIII IV； Ｅ：I II IVIII。

46．要构建一生物的完整基因组文库可以对DNA采用【 】 Ａ：DNA自动合成法； Ｂ：随机片段法； Ｃ：PCR 法； Ｄ：Southern杂交法； Ｅ：引物标记法。

47．建立人的基因文库所需的技术是 【 】 Ａ：分子克隆技术； Ｂ：体外转录技术； Ｃ：体外翻译技术； Ｄ：产物分泌技术； Ｅ：基因诱导表达技术。

47．构建基因组文库一般使用的载体是 【 】 Ａ：Ti质粒； Ｂ： 替换型载体； Ｃ： 插入型载体； Ｄ：共整合型载体； Ｅ：二元载体系统。

48．强化基因转录的元件是 【 】 Ａ：密码子； Ｂ：复制子； Ｃ：启动子； Ｄ：内含子； Ｅ：外显子。

49．原核生物启动子的特征之一是 【 】 Ａ：GC 富积区； Ｂ：TATA 区； Ｃ：转录起始位点； Ｄ：长度平均 1 kb； Ｅ：含有某些稀有碱基。

50．下列基因元件中属于反式元件的是 【 】 Ａ： 阻遏蛋白； Ｂ： 启动子； Ｃ： 操作子； Ｄ： 终止子； Ｅ： 增强子。

51．强化 mRNA 翻译的元件是 【 】 Ａ： 启动子； Ｂ： 复制起始区； Ｃ： 增强子； Ｄ： 回文结构； Ｅ： SD 顺序。

52．下列 mRNA 5' 端序列中，具有典型的原核生物 Shine-Dalgarno 序列特征的是 【 】 Ａ：5'……UAUAAG……3'； Ｂ：5'……AGGAGG……3'； Ｃ：5'……AUAUCU……3'； Ｄ：5'……CCUCCA……3'； Ｅ：5'……GGCCCG……3'。

53．为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达，有时可以采用同步克隆表达受体菌 tRNA 基因的方法，其机理是 【 】 Ａ：增强基因的转录；

Ｂ：纠正受体菌密码子的偏爱性； Ｃ：促进氨酰基 tRNA 合成酶的表达； Ｄ：稳定 mRNA 在核糖体上的定位； Ｅ：启动 mRNA 的翻译。

．高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，形成包涵体。原因是 【 】 Ａ： 表达产物不溶解； Ｂ： 表达产物不能正确折叠； Ｃ： 表达产物不含糖基侧链； Ｄ： 表达产物难以形成二硫键；

Ｅ： 表达产物中极性氨基酸残基比例下降。 55．包涵体是一种 【 】

Ａ：受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒； Ｂ：大肠杆菌的亚细胞结构；

Ｃ：噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒； Ｄ：用于转化动物细胞的脂质体； Ｅ：外源基因表达产物的混合物。

56．某一表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中高效表达的基因 A ，若将外源基因 B 插入基因 A 的 3' 末端，并维持基因 B 的阅读框架不变，使两者在受体细胞中产生融合蛋白，则正确的重组策略是 【 】

Ａ A 基因用 BamHI 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 Ｂ A 基因用 BglII 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 Ｃ A 基因用 EcoRV 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接 Ｄ A 基因用 PvuII 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接

Ｅ A 基因用 SmaI 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接

57．外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是 【 】

I：融合基因能稳定扩增；II：融合蛋白能抗蛋白酶的降解；III：表达产物易于亲和层析分离。 Ａ： III； Ｂ： I + II； Ｃ： I + III； Ｄ： II + III； Ｅ： I + II + III。

58．有利于基因表达的蛋白质产物分泌的元件是 【 】 Ａ： 核糖体； Ｂ： 信号肽； Ｃ： 终止子； Ｄ： 亲水性氨基酸； Ｅ： 多聚腺苷酸。

59．蛋白质工程的战略是设计定做新型蛋白质，但其具体操作是在基因水平上进行的，这些操作技术包括基因定向突变及人工合成，其中 M13 法和 PCR 法定点突变的原理是 【 】

Ａ： 在 DNA 聚合反应所需的引物中直接引入突变； Ｂ： 在 DNA 聚合反应过程中通过碱基对错配引入突变； Ｃ： 在 DNA 模板单链中用化学试剂诱导突变； Ｄ： 在 DNA 连接反应过程中引入突变； Ｅ： 化学修饰 DNA 体外复制产物。

60．基因工程菌中重组质粒的丢失机制是 【 】 Ａ： 重组质粒渗透至细胞外； Ｂ： 重组质粒被细胞内核酸酶降解； Ｃ： 重组质粒在细胞时不均匀分配； Ｄ： 重组质粒杀死受体细胞；

Ｅ： 重组质粒刺激受体细胞提高其通透性。