一种益生元组合物[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号(10)申请公布号 CN 104824511 A (43)申请公布日(43)申请公布日 2015.08.12

(21)申请号 201510263942.3(22)申请日 2015.05.21

(71)申请人张利民

地址100192 北京市海淀区观澳园7-3-701

房间(72)发明人张利民

(74)专利代理机构北京华科联合专利事务所

(普通合伙) 11130

代理人王为 孟旭(51)Int.Cl.

A23L 1/09(2006.01)

权利要求书1页 说明书14页

()发明名称

一种益生元组合物(57)摘要

本发明涉及一种益生元组合物，所述组合物含有低聚果糖，水苏糖，低聚木糖，聚葡萄糖和硫酸氨基葡萄糖，所述组合物可制成适合服用的食品或保健食品，经过实验确认，具有免疫增强作用。

C N 1 0 4 8 2 4 5 1 1 A CN 104824511 A

权 利 要 求 书

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1.一种益生元组合物，所述组合物，各组分的重量配比如下：

2.根据权利要求1所述的益生元组合物，所述组合物，各组分的重量配比如下：

3.权利要求1所述的益生元组合物的制备方法，所述方法包括将各组分混合的步骤。

4.以权利要求1所述的益生元组合物作为活性成分制成的适合口服的制剂。5.根据权利要求4所述的制剂，是食品或保健食品。6.根据权利要求5所述的制剂，是颗粒剂或粉剂。7.根据权利要求6所述的制剂，是将所述颗粒剂或粉剂分装成袋，每袋5克。

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说 明 书一种益生元组合物

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技术领域：

[0001] 本发明涉及一种对益生菌增殖有利的益生元组合物，特别涉及含有低聚果糖，水苏糖，低聚木糖，聚葡萄糖和氨基葡萄糖的组合物。背景技术：

[0002] 益生元是一种膳食补充剂，通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响，从而改善寄主健康。最基本的益生元为碳水化合物，但定义并不排除被用作益生元的非碳水化合物物质。理论上来讲，任何可以减少现在有害菌种，而有益于促进健康的菌种或活动的抗生素都可以叫做益生元。益生元，在通过消化道时，大部分不被人体消化，而是被肠道菌群吸收。最重要的是，它只是增殖对人体有益的菌群(益生菌)，而不是增殖对人体有潜在致病性或活性的有害菌。[0003] 益生元给益生菌提供“食物”,能够被肠道内有益细菌分解吸收，促进有益细菌生长繁殖。大家所熟悉的双歧因子就是促进肠内双歧杆菌生长的益生元。益生元主要包括各种寡糖类物质(Oligosaccharides)或称低聚糖(由2～10个分子单糖组成)。更概括的说法是功能性低聚糖。如异麦芽低聚糖就是一种益生元。[0004] 益生元的已知功效如下：[0005] 减轻便秘症状：

[0006] 此功效已经如食用纤维的功效一样被很好的证实了。很多益生元为在大肠中发酵的碳水化合物。通过发酵产生肠气体来增大肠体积从而缩短了消化物在肠中的逗留时间。便秘是由消化物在肠中逗留时间太长而引起的。经过时间短了自然有助于抵抗便秘。[0007] 除此之外，许多碳水化合物可以增加肠的水分含量，酸的分泌可以刺激肠蠕动。这些同样可以减少消化物经过肠的时间。

[0008] 基于对新产代谢的改变而不是通过刺激某种细菌，最好的功效是由包括膳食纤维在内的碳水化合物混和物获得。[0009] 降低肠pH值：

[0010] 该作用是由于新产代谢来自从蛋白质发酵(生成氨，高pH)向更多碳水化合物发酵(生成酸)的改变。一些肠道疾病如节段性会肠炎和IBS(急性肠道综合症)的特征都是有过高的肠pH值。降低pH从而可以降低(并非治愈)这些疾病的发生。这是有益于病人的。

[0011] 调理细菌平衡：

[0012] 益生元可以帮助肠在经过抗生素，腹泻，压力或其它药物(非抗生素类)的干扰后恢复肠内细菌平衡。通过对某特定菌群的选择性的刺激而使平衡恢复。可能发生在很多种不同菌群上。这种刺激可以是直接的(被选择的细菌在益生元上生长)或是间接的(一些细菌释放对其它细菌生长有益的物质)

这种情况下，选择性刺激和新陈代谢的改变都起到作用。

[0014] 免疫增强：

[0013]

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说 明 书

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益生元本身对免疫系统无任何作用。但是通过改变肠菌落从而可能影响免疫系统。该刺激可以是有益的或是无益的，有益作用是指免疫系统被激活来抵抗致病菌。无益作用是说由于刺激可能引起的过敏反应。

[0016] 食用益生元低聚糖也可以通过促进双歧杆菌增殖而有效降低细菌产生的p葡萄糖醛酸酶、偶氮还原酶、硝基还原酶等可催化前致癌原成为致癌物的酶活性。低聚糖也能同一定的毒素、病毒和细菌表面结合而作为～种免疫佐剂，可减缓对抗原的吸收，增强抗原的效价和人体体液免疫力。[0017] 促进婴儿健康：

[0018] 四岁以下儿童的肠菌落很不稳定。许多口入致病菌都可以干扰微生物菌落。可以稳定菌落的物质可被认为是益生元。一些研究指出有些商业化的单糖可以改变菌落和降低pH值而起到由稳定效应。

[0019] 氨基葡萄糖(C6H13NO5)又称葡萄糖胺、葡糖胺或氨基葡糖，是葡萄糖的一个羟基被氨基取代后的化合物。氨基葡萄糖是蛋白质或脂类糖基化反应中的重要前体。临床常用硫酸氨基葡萄糖或盐酸氨基葡萄糖。

[0020] 氨基葡萄糖是自然界含量最丰富的单糖之一。工业上通常采用水解甲壳类动物外骨骼制取氨基葡萄糖。氨基葡萄糖经常被用于骨关节炎的膳食辅助治疗，氨基葡萄糖是人体内合成的物质，是形成软骨细胞的重要营养素，是健康关节软骨的天然组织成份。随着年龄的增长，人体内的氨基葡萄糖的缺乏越来越严重，关节软骨不断退化和磨损。美国、欧洲和日本的大量医学研究表明：氨基葡萄糖可以帮助修复和维护软骨，并能刺激软骨细胞的生长。

[0021] 氨基葡萄糖的主要作用如下：[0022] 1、退行性关节炎

[0023] 氨基葡萄糖主要通过修复关节软骨，催生关节滑液，使关节面之间不再发生硬性摩擦，不再出现疼痛、肿胀、骨摩擦音等症状，并通过对关节软骨的修复，使关节间隙恢复正常，关节功能得到彻底恢复。[0024] 2、骨质增生

[0025] 外源性摄入氨基葡萄糖，使关节内氨基葡萄糖含量恢复平衡状态，刺激软骨细胞合成蛋白多糖和胶原纤维，生成软骨基质，修复破损软骨，使关节软骨自身修复能力提高，通过氨基葡萄糖修复关节软骨、催生关节滑液，对骨质增生性关节炎(骨关节炎)起到根本性治疗作用。[0026] 3、半月板损伤

[0027] 氨基葡萄糖能够修复损伤的半月板，同时修复半月板损伤继发的关节面软骨破损，从根本上修复关节损伤。同时氨基葡萄糖能够清除有害因子，抑制并消除关节滑膜炎性反应。

[0028] 4、髌骨、软化症

[0029] 外源性地补充氨基葡萄糖，可修复髌骨与股骨之间的关节软骨。现有益生元种类较多，有些加入中药或西药，有些和益生菌合用，如现有专利技术中描述的含有低聚果糖和水苏糖以及相关添加剂的益生元产品有：

[0030] [0031]

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201210470492.1201080007451.8

[0032]

200810302182.2201310001903.7201380042948.7201010520691.X201410330755.8

[0033]

说 明 书

一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法用于治疗胃溃疡和十二指肠溃疡的包括质子泵抑

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制剂及益生元的药物组合物合生素药物组合物

用于预防和治疗便秘的益生菌发酵组合物用于治疗胃食管反流病的药物组合物一种适合婴幼儿食用的金银花液体复合制剂用于妇科感染的组合物及制剂

本发明在益生元部分的基础上，研究出一种新的益生元组合物，将适量的硫酸氨基葡萄糖加入到含有低聚果糖，水苏糖，低聚木糖，聚葡萄糖的益生元中制备成一种益生元组合物，经过筛选各组分的剂量，意外的发现本发明配比的益生元组合物具有良好的协同增加免疫力的作用。发明内容；

[0034] [0035]

本发明提供一种益生元组合物，所述组合物，各组分的重量配比如下：

[0036] [0037]

优选的，所述组合物，各组分的重量配比如下：

[0038]

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说 明 书

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以上成分中，所述份为重量份，可以以g，kg或mg等为单位。[0040] 以上成分均为现有技术，从市场上可以购买得到，属于食品或保健食品范畴。[0041] 本发明进一步包括本发明组合物的制备方法，所述方法包括将上述重量配比的组分混合的步骤。

[0042] 本发明的益生元组合物可以作为一种免疫增强剂的活性成分，所述免疫增强剂可以包括任何一种适合口服的制剂形式，如片剂，胶囊，颗粒剂，口服液，粉剂，丸剂等，也可以制备成适合的可食用的食品形式，如糖块，饼干，奶制品，冰棍，面包，果酱等。[0043] 上述制品的制备可以采用常规生产技术即可，如以本发明的益生元组合物作为活性成分，必要时加入辅料，如甜味剂，矫味剂，赋形剂等用制剂学常规技术制备成片剂，胶囊等，或以食品常规技术制备成食品。[0044] 本发明的益生元组合物，包括两部分的成分，一部分为益生元成分，即低聚果糖，水苏糖，低聚木糖，聚葡萄的部分，另一部分为硫酸氨基葡萄糖部分，本发明将硫酸氨基葡萄糖作为强身键骨成分使用，作为益生元补充剂，但本发明意外的发现，这两部分合用具有协同提高免疫力的作用，有关实验如下：[0045] 增强免疫力功能试验[0046] 样品：[0047] 本发明组：取实施例1中本发明的益生元组合物100g，配制成400ml液体，灌胃给药。

[0048] 益生元部分组：低聚果糖90g，水苏糖1g，低聚木糖3g，聚葡萄2g配制成400ml液体，灌胃给药。

[0049] 硫酸氨基葡萄糖组：硫酸氨基葡萄糖4g，配制成400ml液体，灌胃给药。[0050] 实验动物：小鼠200只，雌雄各半，体重18～22g，豚鼠100只，雌雄过半，体重300～350g，

[0051] 剂量选择与受试物给予方式

[0039]

分别取样品分别给予小鼠灌胃，每天一次，灌胃体积为0.2ml/10g·bw，阴性对照

组给予等体积蒸馏水，连续30天。[0053] 试验方法

[00] 上述受试物按体重每天给予，连续30天，在给药同时，每天观察动物的状态，[0055] 每周称取一次动物体重，并按以下方法测定各项指标。[0056] (1)脏器/体重比值测定：小鼠称重记录后脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，称重。计算脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。

[0057] (2)ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)：实验小鼠脱臼处死，浸入75％医用酒精中，无菌取脾，置于盛有Hank's液的无菌小乳钵中，迅速将脾研碎，制成脾细胞悬液，用无菌Hank’s液将细胞透过6层无菌纱布滤入试管中，1000rpm，10min离心2次，

[0052]

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说 明 书

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弃上清将细胞弹起，加入2mL含10％小牛血清的RPMI10完全培养液重悬，用细胞计数仪测定脾细胞数，将细胞数调成实验所需浓度。将调整好细胞浓度的细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔中加入50μl ConA溶液(相当于5μg/ml)，另一孔作为对照，置培养箱中(5％CO2，37℃)培养72小时。培养结束前4小时，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI10培养液和50μl的MTT/RPMI10(5mg/ml)，继续培养4小时，培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解，然后将此液体移入96孔酶标板中，每个孔分装4个孔作为平行样，在酶标仪上比色，结果以波长570nm处的OD值表示。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示。[0058] (3)迟发型变态反应(足跖增厚法)：每只小鼠经腹腔注射2％(用生理盐水配制)压积SRBC悬液0.2mL。免疫4d后，用卡尺测量左后足跖厚度(本底值)，同一部位重复测量三次，计算平均值。然后在测量部位皮下注射20％压积SRBC，每只小鼠20μL。于注射后24h再次测量左后足跖厚度。用攻击前后两次足跖厚度值的差值表示足跖肿胀程度。[0059] (4)抗体生成细胞检测：豚鼠股动脉(30只)采血，分离出血清，将其与压积SRBC按1:5混合，4℃放置30min，不时摇动，2000rpm，10min离心取上清，分装，—30℃保存，用时以SA缓冲液按1:10稀释。将琼脂糖用双蒸水配制成1％溶液，水浴煮沸，使之完全熔化，涂于清洁玻片上，待干后放片盒中备用。每只小鼠经腹腔注射2％(用生理盐水液配制)压积SRBC悬液0.2mL。将免疫5天后的小鼠脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hank’s液的小乳钵内，研碎，用2层纱布将细胞滤入10ml试管中，1000rpm，10min离心，弃上清，用Hank’s液洗1遍，将脾细胞悬浮在10mLHank’s液中备用。琼脂糖配制成1％水溶液，水浴煮沸，使之完全熔化，与等量双倍Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％(用SA缓冲液配制)压积SRBC悬液50μL、脾细胞悬液10μL，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入37℃培养箱中孵育1.5小时，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续孵育1.5小时后，计数溶血空斑数。吸取20ul脾细胞悬液，加入10ml细胞稀释液，充分混匀，计数脾细胞数。用空斑数/106脾细胞来表示。[0060] (5)血清溶血素的测定(血凝法)：小鼠经腹腔注射2％压积SRBC(用生理盐水配制)悬液0.2mL。将免疫4-5天后的小鼠摘除眼球，取全血于微量离心管中，静置1h，2000r/min，10min离心，收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100μl，再加入100μl 0.5％(v/v)的SRBC悬液，混匀，装于湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。

[0061] 结果用抗体积数表示。抗体水平＝(S1+2S2+3S3······nSn)式中1、2、3······n代表对倍稀释的指数，S代表凝集程度的级别，抗体积数约大，表示血清抗体越高。

[0062] (6)小鼠碳廓清试验：于小鼠尾静脉注射稀释的印度墨汁0.2ml，待墨汁注入，立即计时。分别于2、10分钟，从左侧内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2mL Na2CO3溶液中。以Na2CO3溶液作空白对照，用紫外可见分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)。将小鼠称重后，颈椎脱臼处死，取肝脏和脾脏，去尽筋膜，称重(g)。计算吞噬指数。(7)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞实验(半体内法)：小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，间隔30分钟后，再注射Hank's液2ml，用颈椎脱臼法处死小鼠，轻轻按揉腹部30次，以充分洗出腹腔巨噬细胞，然后将腹壁剪开一个小口，用注射器吸取腹腔洗液

[0063]

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说 明 书

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0.5ml，滴于画有圆圈的载玻片上。将玻片放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30分钟。孵育结束后迅速用Hank's液将未贴壁细胞冲掉，晾干。于甲醇液中固定5分钟，Giemsa液染色20分钟。于油镜下对每只小鼠计数100个巨噬细胞，记录巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数目及巨噬细胞所吞噬鸡红细胞的总数。按下式计算吞噬指数和吞噬率：

[00] 吞噬指数＝巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的总数/计数的巨噬细胞

[0065] 吞噬率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100％[0066] (8)NK细胞活性测定(LDH法)：实验前24小时将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前，用含10％小牛血清的RPMI10完全培养液调整细胞浓度为1×105个/mL。小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，置于盛有Hank's液的无菌小乳钵中，迅速将脾研碎，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗涤，1000rpm，10min离心2次。弃上清将沉淀细胞弹起，加入2mL含10％小牛血清的RPMI10完全培养液重悬，用细胞计数仪测定脾细胞数。将细胞数调成5×106个/ml，使效(脾细胞)靶(YAC-1)细胞比为50：1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔细胞培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃，5％CO2培养箱中培养4小时。培养结束时，将96孔细胞培养板以1500rpm离心5分钟，每孔吸取上清100μL置96孔酶标板中，加入LDH基质液100μL，室温反应3分钟，然后每孔加入1mol/L的HCl溶液30μL终止反应，在490nm处用酶标仪测OD值。

[0067] NK细胞活性％＝(反应孔OD—自然释放孔OD)/(最大释放孔OD—自然释放孔OD)×100％

[0068] 实验结果

[0069] (1)对动物体重变化的观察，见表1、2、3、4、5：[0070] 表1增强免疫力制剂对免疫I组小鼠体重的影响：

[0071]

[0072]

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说 明 书

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[0073] [0074]

表2增强免疫力制剂对免疫II组小鼠体重的影响：

[0075] [0076]

表3增强免疫力制剂对免疫III组小鼠体重的影响：

[0077]

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说 明 书

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[0078] [0079]

表4增强免疫力制剂对免疫IV组小鼠体重的影响：

[0080] [0081]

表5增强免疫力制剂对免疫V组小鼠体重的影响：

[0082]

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说 明 书

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由表1-5可见，各剂量组实验初期、实验中期、实验末期小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与阴性对照组比较，无显著性差异(P>0.05)。

[0084] (2)对小鼠胸腺/体重比和脾脏/体重比得影响，见表6：[0085] 表6增强免疫力制剂对小鼠免疫器官脏器/体重比的影响

[0083] [0086]

由表6可见：经口给予小鼠各剂量组增强免疫力制剂30天，对小鼠脾脏/体重比

值和胸腺/体重比值无显著性影响(P>0.05)。

[0088] (3)增强免疫力制剂对小鼠细胞免疫功能的影响，见表7、8：

[00] A:增强免疫力制剂对小鼠ConA诱导淋巴细胞转化能力实验的影响，见表7[0090] 表7增强免疫力制剂对小鼠淋巴细胞转化能力实验结果(淋巴细胞增殖能力)

[0087] [0091]

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说 明 书

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由表7可见：增强免疫力制剂三组均能显著提高小鼠淋巴细胞转化能力，与阴性对照组的小鼠淋巴细胞转化能力有显著性差异，其中本发明组效果最优，并具有协同增效作用。

[0093] B增强免疫力制剂对小鼠迟发型变态反应的影响,见表8：

[0092] [0094]

表8增强免疫力制剂对小鼠迟发型变态反应(足跖增厚法)影响(足跖厚度差值

mm)

[0095]

[0096]

由表8可见:三组足跖厚度的差值显著高于阴性对照组足跖厚度的差值，其中本

发明组效果最优，并具有协同增效作用。

[0097] [0098]

细胞免疫功能测定结果：小鼠淋巴细胞转化实验结果为阳性；迟发型变态反应(足跖增厚法)结果为阳性。细胞免疫功能测定结果为阳性。[0099] (4)增强免疫力制剂对体液免疫功能的影响，见表9、10：

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说 明 书

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A增强免疫力制剂对小鼠抗体生成细胞的影响，见表9：

6

[0101] 表9增强免疫力制剂对小鼠抗体生成细胞数影响(空斑数/10脾细胞)

[0102]

由表9可见：各组空斑数与阴性对照组空斑数比较，无显著性差异(P>0.05)。

[0104] B:增强免疫力制剂对小鼠血清溶血素的影响，见表10：[0105] 表10增强免疫力制剂对小鼠血清溶血素的影响(抗体积数)

[0103] [0106]

[0107]

由表10可见：三组的抗体积数显著高于阴性对照组抗体积数，其中本发明组效果

最优，并具有协同增效作用。

[0109] (5)增强免疫力制剂对小鼠单核--巨噬细胞功能的影响，见11、12：A:增强免疫力制剂对小鼠单核--巨噬细胞碳廓清的影响，见表11：

[0110] 表11增强免疫力制剂对小鼠单核--巨噬细胞碳廓清的影响(吞噬指数)

[0108] [0111]

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说 明 书

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由表11可见：三个剂量组能显著提高小鼠碳廓清能力，其中本发明组效果最优，并具有协同增效作用。

[0113] B:增强免疫力制剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响，见表12：[0114] 表12增强免疫力制剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响

[0112] [0115]

由表12可见：三组吞噬百分率、吞噬指数与阴性对照组吞噬指数比较均有所提

高，其中本发明组效果最优，并具有协同增效作用。

[0116] [0117] [0119]

(6)增强免疫力制剂对小鼠NK细胞活性的影响，见表13：[0118] 表13增强免疫力制剂对小鼠NK细胞活性的影响

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说 明 书

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由表13可见：三组的NK细胞活性与阴性对照组NK细胞活性比较有显著性差异，其中本发明组效果最优，并具有协同增效作用。[0121] 以上实验结果表明，本发明益生元组合物因加入硫酸氨基葡萄糖这一成分而具有免疫增加作用，特别适用于脾胃虚弱，骨质疏松，需要补充钙质的人群的长期服用，也适合加强儿童骨质生长，增加机体免疫力。

[0120]

具体实施方式：

[0122] 以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的。[0123] 实施例1

[0124] 益生元组合物，每100g中含有以下重量份的组分：

[0125]

[0126] [0127] [0128] [0129] [0130] [0131] [0132] [0133] [0134]

制备方法，将上述重量配比的组分混合即得。

实施例2

含有益生元组合物的制剂益生元组合物，100g辅料，100g

上述原料混合，制粒，压片，制备成0.5g/片的片剂。实施例3

含有益生元组合物的制剂益生元组合物，100g

15

CN 104824511 A[0135] [0136] [0137] [0138] [0139] [0140] [0141] [0142] [0143] [0144] [0145] [0146] [0147] [0148] [0149]

说 明 书

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辅料，100g

上述原料混合，制粒，装入胶囊中，制备成0.5g/粒胶囊的胶囊剂。实施例4

含有益生元组合物的制剂益生元组合物，100g蔗糖等辅料，100g上述原料混合，制粒，包装，每袋装有5克的颗粒剂。实施例5

含有益生元组合物的制剂益生元组合物，100g蔗糖等辅料，100g

上述原料制备成粉末混合后包装，每袋装有5克的粉剂。实施例6

益生元组合物，所述组合物，各组分的重量配比如下：

实施例7

[0151] 益生元组合物，所述组合物，各组分的重量配比如下：

[0150] [0152]

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