墨 现代医院2012年5月第12卷第5期专业技术篇Modem Hospital May 2012 Vol 12 No 5 创伤患者血清神经内分泌激素及细胞因子的变化研究 韦酋亨谢扬韩 溟 STUDY ON THE CHANGE OF CYTOKINES AND NEUROHORMONAL ACTIVAT10N lN THE SERUM OF TRAUMATIC PATIENTS WEI Qiuheng,XIE 【摘,HAN 3ling 要】 目的 旨在探讨神经内分泌激素及细胞因子在创伤后的变化及其临床意义。方法63例创 重度创伤患 伤患者根据ISS评分分为中重度两组,创伤后4 h内采血,分别测定患者血清肾上腺素(NE)、促肾上腺皮质激 素(ACTH)、皮质醇及促炎因子肿瘤坏死因子一Ix(TNF—d)和白介素一6(IL一6)的水平。结果度创伤者中显著高于中度创伤者(P<0.05)。结论者在血清NE、ACTH、皮质醇及TNF—IX和IL一6水平均较对照组显著升高(P<0.05);而且后三者水平在重 从神经、内分泌、免疫三个系统入手,研究创伤应激的发 生机制,并设法对其进行调控,将会对其治疗提供理论依据。 【关键词】 创伤 肾上腺素促肾上腺皮质激素皮质醇肿瘤坏死因子一IX白介素一6 【Abstract】0bjective To explore the change of Cytokines and Neurohormonal Activation in traumatic pa- tients and their clinical significance.Methods According to the ISS Grade,63 traumatic patients were divided into two groups,one was moderate injury,and the other was severe.The control group was normal people.Their blood was taken within 4 hours after injury.The level of the epinephrine(NE),adrenocorticotrophic hormone(ACTH), cortisol,inflammation factors such as tumor necrosis factor— (TNF一 )and interleukin一6(IL一6)were tested in the serum.Results The level of NE,ACTH,eortisol,TNF— and IL一6 in the traumatic patients serum were sig- nificantly higher than that in control group(P<0.05). e level of eortisol,TNF一0l and IL一6 in severe traumatic patients Was signiifcantly higher than hatt in moderate one(P<0.05).Conclusion Study the activating mechanism of traumatic stress reaction through nerve,endocrine nd aimmunity system and try to adjust them,it will propose the theoretical bases of treatment. 【Key words】Trauma,Epinephrine(NE),Adrenoeorticotrophic hormone(ACTH),Cortisol,Tumor necro— sis factor一0l(TNF—d),Interleukin一6(IL一6) 【Author s address】 Chao—an Changjing Hand Suragery Hospital of Chaozhou City,Guangdong Province 515638 PRC doi:10.3969/j.issn.1671—332X.2012.5.006 机体创伤后,神经内分泌系统发生明显变化,产生了 1材料与方法 1.1 试剂 儿茶酚胺、糖皮质激素、甲状腺素等介质,它们不仅能调节 心肺功能、机体代谢等,还常调节免疫功能以适应创伤应 激,维持机体稳态 J。儿茶酚胺不仅能调节机体心肺功 能,其在创伤早期还能调控炎症反应。糖皮质激素对炎症 反应常有抑制作用,但它也使机体处于过度分解代谢状 态。本实验观察了临床创伤患者入院时血中肾上腺素 (NE)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇及几个重要炎 症因子的水平,探讨机体受到外力创伤后神经内分泌与免 疫共同调节的作用。 基金项目:广东省科技计划项目(编号:2008I?,080702009) 人肾上腺素ELISA检测试剂盒、人促肾上腺皮质激 素ELISA检测试剂盒、人皮质醇(Cortiso1)ELISA试剂盒 购自研域(上海)化学试剂有限公司。肿瘤坏死因子 (TNF— )ELISA检测试剂盒、白介素一6(IL一6)ELISA 检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.2临床资料 2009年6月~2010年l2月,就诊于汕头大学医学院 第二附属医院急诊科的63例中重度创伤患者(ISS≥16 分)。男47例,女16例;年龄15~65岁。均在创伤后4 h 内送至包诊室。按ISS评分将病例分为中度创伤(ISS 16 25分)、重度创伤(ISS ̄25分)。选取健康体检者20例 作为对照组,男6例,女14例;年龄l7—62岁。 —韦酋亨:潮州市潮安长江手外科医院谢515041 广东潮州515638 扬 韩 溟:汕头大学医学院第二附属医院 广东汕头 扬 I.3血样收集及样品检测 通讯作者:谢采集患者外周静脉血,离心,分离血清,一80℃保存, 现代医院2012年5月第12卷第5期专业技术篇Modem Hospital May 2012 Vol 12 No 5 19 待测。样品采用相应的检测试剂盒检测,按试剂盒说明操 正常健康人血清NE,ACTH及皮质醇水平分别为 作,最后在酶标仪上检测450 nm的OD值,根据标准曲 (56.2±14.1)、(23.9±13.4)、(26.7±9.2)rig/ml。而仓0 线,计算浓度。 伤患者血清NE、ACTH及皮质醇水平与对照组比较均显 1.4统计分析 著升高(p<0.05)(图1A、lB、1c),在中度创伤患者中分 结果采用均数±标准差(面±SD)表示。Kolmogomv— 另0为(133.1±28.4)、(128.3±52.8)、(151.9±38.7)ng/ Smimov检验用于评估样本分布状态。数据采用单因素方 ml,而在重度创伤患者中分别为(129.9±25.2)、(143.2 差分析。数据使用Prism 5.0软件进行统计处理。 ±49.7)、(117.5 4-43.9)ng/ml。但中重度创伤患者之间 2结果 NE和ACTH水平并没有显著性差异,而重创伤患者皮质 2.1创伤后神经内分泌的变化 醇水平显著低于中度创伤者(P<0.05)。 : g 一一暑/暑d)懈裁峰谜琶 韭掣 : g e 柏 O 如,加 O O m O O 懈 e 鹭 链 略 堑 正常对照中度创伤重度创伤 正常对照中度创伤重度创伤 图1创伤对神经内分泌激素的影响。A肾上腺素;B促肾上腺皮质激素;C皮质醇。 2.2创伤血清炎症因子的变化 多器官功能衰竭(MODS)。有研究表明 ,创伤的发展以 创伤患者血清炎症因子TNF一0l和IL一6水平明显 及SIRS、MODS等并发症的发生,与机体的一些炎症介质 高于正常健康对照。而且升高水平与创伤的严重程度有 水平的快速升高与病情进展密切相关,特别是同TNF—Ot 关。重度创伤患者血清中TNF—Ot和IL一6显著高于中 及一些白细胞介素等细胞因子的产生密不可分,在创伤后 度伤伤者(p<0.05)。见表1。 炎症反应和免疫紊乱上发挥着重要作用。实验发现重度 表1 创伤患者血清炎症因子 创伤患者皮质醇水平显著低于中度创伤患者,而皮质醇是 强的体内抑炎物质,其水平降低,势必引起炎症的扩大。 我们同时检测到重度创伤患者血清中促炎因子TNF— 和IL一6显著高于中度创伤患者,与以往的报道相似 j。 本研究观察到中重度创伤早期肾上腺素(NE)、促肾 上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇及促炎因子TNF一 和IL 注: p<0.O5与正常对照比较; P<O.05与中度创伤比较 一6血清含量明显高于对照组,且后三者与创伤损伤程 度相平行。这些物质在创伤早期的大量出现,打破了机 3讨论 体内在平衡,它们都可刺激血管内皮细胞,引起血管内皮 创伤后常发生应激反应,导致包括交感神经系统及下 细胞激活和损伤,导致微循环障碍,其协同作用更加剧 丘脑一垂体一肾上腺、性腺、甲状腺轴活化的神经内分泌 了创伤后的再损害,导致机体发生炎症反应综合征,从而 变化,产生以儿茶酚胺(NE、E)、糖皮质激素为主的多种 加重休克及组织器官的损害程度。严重创伤可使机体产 介质,其中交感神经系统活化在创伤后应激反应中具有重 生复杂的应激反应,产生大量的炎性因子及继发性损害。 要作用…。本研究显示,创伤后4 h伴随儿茶酚胺大量释 因此,如果从神经、内分泌、免疫三个系统入手,研究其 放,即发生下丘脑一垂体一肾上腺素皮质(HPA)轴明显 发生机制,并设法对其进行调控,将会对其治疗提供理 活化,表现为ACTH、皮质醇水平明显增加。早期一定程 论依据。 度的应激反应对于机体具有重要意义,不仅调控机体众多 参考文献 ’ 功能以维持稳态,而且由于神经一内分泌一免疫网络的存 [1]MOLINA P E.Neurobiology of the stress response:contribution of 在,产生的以儿茶酚胺、糖皮质激素为代表的大量介质可 th sympathetienervous system to the neumimmune axis in traumatic 通过作用于免疫细胞(巨噬细胞、淋巴细胞等)表面的受 injury[J].Shock,2005,24(1):3—10. 体而影响免疫功能 “ 。 [2]周元国.严重创伤应激反应及应激不良[M]∥王正国,付小 重症创伤作为刺激源可在极短的时间内启动伤者的 兵,周元国.分子创伤学.福州:福建科学技术出版社,2004: 167—175. 应激防御机制,诸如内分泌激素、体液和细胞免疫应答机 [3]WERLING D,JUNGI T W.Toll—like receptors limking innate and 制等。而上述剧烈的应激反应常可造成全身重要脏器的 adaptive immune response[J].Veteinary immunology and immu- 功能紊乱,最为常见的是严重全身性炎症反应(SIRS)及 nopathology,2003,9:1 1—12. 现代医院2012年5月第12卷第5期专业技术篇Modem Hospital May 2012 Vol 12 No 5 蒲公英提取物对MKN一45胃癌细胞株P53和Ki67 表达的影响 詹锋刘晓颖 荣卡彬 王昌俊杨素清 EFFECT OF DANDE Ll0N EXTRACT ON EXPRESSION OF P53 AND KI67 IN GASTRIC CANCER MKN45 CELL LINES ZHAN Feng,LIU Xiaoying,RONG Kabin,et al 【摘要】 目的检测蒲公英提取物对MKN45胃癌细胞的P53、Ki67两种蛋白的表达的影响,探求中草药蒲公英抗癌 作用的依据。方法 以小鼠血清药物学方法配制蒲公英提取物药液,对MKN45胃癌细胞进行培养传代,取处于对数生长期 的同一代细胞加入药液血清,应用免疫组化(s—P法)检测p53、Ki67的表达状况。结果4组中p53的表达分别为100% (5/5)、60%(3/5)、80%(4/5)和6o%(3/5),所有含药组合并后其t'53阳性表达率与对照组之间具有显著性差异(P< 0.05),各含药组的Ki67阳性表达率均高于对照组,分别为87%、96%、97%、92%,但目前尚未发现它们之间具有显著性差 异(P>0.05)。结论蒲公英可能有降低胃癌细胞p53的阳性表达的作用。 【关键词】 蒲公英提取物MKN一45胃癌细胞P53表达Ki67表达 I Abstract】 Objective rI.}le effect of dandelion extract(DE)on expression of P53 and Ki67 in gastirc cancer MKN45 cell were studied as a way to evaluate the antitumor effects of Mongolian dandelion herb.Methods 20 mice were used to prepare four groups of the mouse blood scram(including a normal control group and three groups of diferent concentrations of DE).After the ser- urns were added in the gastric cancer MKN45 cell culture media respectively,the expression of P53 protein and Ki67 protein were ex— amined respectively by streptavidin—peroxidase conjugated method(SP).Results The expression of p53 was found 100%(5/5), 60%(3/5),80%(4/5)and 60%(3/5)respectively in the four groups.The positive rate of p53 in DE groups(all the groups to- gether)was lower than that in control group;the expression of Ki67 was found 87.O%,96.0%,97.5%and 92.0%in the four groups.The expression of Ki67 in each group of the three DE groups was higher than that in control group.Conclusion There is a weak experimentl eviadent to show that TE decrease the expression of P53 in gastic cancer rMKN45 cell while increased the expression 0fKi67. 【Key words】Dandelion extrct(DE),Gaastirc cncaer MKN45 cell,P53,Ki67,Expression 【Author s address】 Guangdong Provincila Medicla Science Institute,Guangdong Provincila People s Hospitla,Guangzhou City,Guangdong Province 510080 PRC doi:10.3969/i.issn.1671—332X.2012.5.007 蒲公英临床上多用于咽喉炎、支气管炎、乳腺炎和泌 尿系感染等感染性疾病的治疗…,也用于抑制幽门螺杆 在于通过实验手段检测单味中药蒲公英的抗癌作用,寻找 其抗癌作用的循证医学证据。 1材料与方法 1.1材料 菌的治疗 。近20年来逐渐出现了蒲公英抗癌作用的实 验报道。本实验通过测试不同浓度的蒲公英提取物对实 验室培养的胃癌细胞株的P53和Ki67蛋白的表达,目的 1.1.1药物蒲公英提取物(粉剂)购自康瑞生物工程 有限公司。使用时用蒸馏水配成高、中、低三种不同浓度 基金项目:广东省中医药局科研课题(编号:2009117) 詹锋刘晓颖荣卡彬广东广州王昌俊杨素清:广东省医学科学院 广东省人民医院510080 的溶液,4℃冷藏保存,供小鼠灌胃、制备含药血清之用。 1.1.2 MKN一45胃癌细胞株 由中山大学附属肿瘤医 院提供。 (接上页) [4]HOMMA T,KATO A,HASHIMOTO N,ct a1.Corticosteroid and cytokines synergistically enhance toll—like receptor 2 expression 1997,ll2(6):321—329. [6] 王小华,石春波,刘 霞.严重创伤患者血清神经肽及细胞因 子的变化[J].山东医药,2010,50(17):67. [7] 边宝娟.特发性肾病综合征血清IL一2、IL一4、IL一6的临床意 义[J].现代医院,2011,11(3):10—12. in respiratory epithelial cells[J].Am J Respir Cell Mol Biol, 2004,31:463—469. [5]DINARELLO C A.Pminflammatory and anti—inflammatory cyto— kines as mediators in the pathogenesis of septic shock[J].Chest,