２０１７年８月第１５卷第２２期 ・实验研究・ ５３ 应用骨髓间充质干细胞复合关节软骨脱细胞基质修复兔软骨缺损的实验研究 张志勇 于光屹 陶丹丹 王惠亭 方世宇 （大连大学附属新华医院骨科，辽宁大连１１６０２１） 【摘要】目的研究骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）复合关节软骨脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的效果。方法选取３６只３～４个月龄的健康 新西兰兔，分离其骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ），并在体外进行培养扩增。将ＢＭＳＣｓ与关节软骨脱细胞基质在体外培养瓶中进行复合培 养约３ ｄ。将实验对象随机分为３组，分别进行３种不同的处理，实验结果用关节软骨组织学评分标准进行评分。结果移植手术后１２周， 移植培养好的骨髓间充质干细胞和关节软骨脱细胞基质复合物的实验组修复组织和周围组织整合良好，且修复效果显著优于移植单独的关 节软骨脱细胞基质组和空白对照组。结论应用骨髓间充质干细胞和关节软骨脱细胞基质的复合物能有效的修复兔关节软骨缺损。 【关键词】骨髓间充质干细胞；关节软骨脱细胞基质；软骨缺损；组织工程学 中图分类号：Ｒ３２９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１—８１９４（２０１ ７）２２—００５３—０２ 关节软骨能通过缓解关节压力来维持关节的正常功能，在关节 的活动中起着至关重要的作用Ⅲ。软骨损伤是一种非常常见的骨科疾 ２．２体外分离及培养骨髓间充质干细胞：常规方法分离培养兔骨髓间 充质干细胞，并利用免疫染色的方法鉴定了骨髓间充质干细胞，发现 ＢＭＳＣｓ特异性高表达抗原ＣＤ ，而不表达层粘连蛋白和ＣＤ 表明我 们分离机培养的骨髓间充质干细胞是正确的。 ２．３制备关节软骨脱细胞基质的支架材料，并研究其特性：Ｍａｓｓｉｏｎ染 病，通常由创伤、肿瘤或感染等原因造成，是临床治疗中一个非常 棘手的问题 ｌ。本研究用骨髓间充质干细胞作为种子细胞，用关节 软骨脱细胞基质作为支架材料，将二者形成的复合物移植到兔软骨 缺损部位。 １材料与方法 色结果可见关节软骨脱细胞基质中存在很多的软骨陷窝且其周围存在 大量的胶原纤维。扫描电镜观察发现脱细胞基质中没有残存的细胞器 或细胞核，表明脱细胞基质的分离非常干净。 １．１实验动物：选取３６只３ 个月龄的健康新西兰兔，体质量约３．０ ｋｇ， 购买自大连医科大学动物实验中心。 １．２实验试剂及仪器：ＤＭＥＭ培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、二氧化 碳培养箱。 １．３骨髓间充质干细胞的分离与体外培养：ＢＭＳＣｓ的分离与体外培养 采用密度梯度离心法，具体参见穆晓红等 研究方法。 １．４关节软骨脱细胞基质的制备：关节软骨脱细胞基质的制备主要利 用冷冻干燥、化学去污剂等方法制备脱细胞的兔关节软骨，具体参见 ２．４观察并评估ＢＭＳＣｓ和关节软骨脱细胞基质的复合物对兔软骨缺损 的修复效果：对３组新西兰兔进行移植处理后首先观察其运动状态和 健康情况，发现经过手术处理的兔子刚开始很少运动，但随着时间不 断地进行自我恢复后，其运动情况逐渐恢复正常。步态姿势正常且术 后２周左右基本恢复健康。 形态学观察，发现第１组新西兰兔在移植手术后，修复效果较 好，对３组实验观察评分具体结果见表１ 统计学分析发现，第１组移 植骨髓间充质干细胞复合关节软骨脱细胞基质的修复效果与第Ⅱ组单 武天佑等 文献中所用方法。 １．５ ＢＭＳＣｓ和关节软骨脱细胞基质体外复合培养：ＢＭＳＣｓ和关节软骨 脱细胞基质体外复合培养根据杨强等 研究中所用方法进行。 １．６制备兔软骨缺损模型：通过耳缘静脉注射方法麻醉所选取的３６只 新西兰兔，用直径为５ ｍｍ的钻孔仪在兔股骨踝关节面钻２～３ ｍｍ深的 独移植关节软骨脱细胞基质和第Ⅲ组不做移植处理的空白组相比都有 显著提高 ＜０．０５）。见表１。 表１各组术后１２周大体观察评分统计结果（Ｅ￣ｓ） 组别 表面平整 填补缺损深度与正常软骨组织融合 总分 孔，制备兔双侧膝关节软骨缺损模型。 １．７实验分组及移植方法：将所制备的３６只软骨缺损模型的新西兰兔 随机分成３组，每组各ｌ２只，分别进行３种不同的处理：第１组兔软骨 缺损部位移植培养好的骨髓间充质干细胞和关节软骨脱细胞基质复合 物，第Ⅱ组移植单独的关节软骨脱细胞基质；第Ⅲ组不做任何移植 注： 代表与第川组比较Ｐ＜０．０５， 代表与第ｌ组比较Ｐ＜０．０５ ３讨论 处理。在手术后４、８、１２周分别处死４只新西兰兔，取双侧膝关节组 织，然后通过免疫组织化学的方法进行染色，并观察缺损组织的修复 情况。 组织工程研究的核心内容是将细胞和生物材料通过一定的方法构 建成具有生命力的活体组织，进一步用重新构建的具有正常生物功能 的活体组织来替换机体内相应的受损组织，并通过与周围的正常组织 完整的融合来达到治疗目的，最终维持机体的正常功能。 １．８统计学分析：实验结果参照Ｓｅｌｌｅｒｓ关节软骨组织学评分标准进行评 分，并利用ＳＰＳＳ１３．０分析各实验组间是否存在显著性差异。数值均以 平均值±标准差表示，统计学分析采用维｝验，，＜０．０５表示具有显著 性差异。 ２结果 本研究应用体外分离培养的骨髓间充质干细胞作为实验的种子细 胞，用关节软骨脱细胞基质作为支架材料，在体外将骨髓间充质干细 胞和关节软骨脱细胞基质通过生物医学的方法构建成具有生命力的活 体组织，进而将二者形成的复合物移植到兔关节软骨的缺损部位并观 察修复结果。从组织学和免疫组织化学的角度分别观察和对比了实验 ２．１实验用新西兰兔统计：本研究选取３６只３～４个月龄的健康新西兰 兔，随机分为３组，每组１２只，整个实验过程中无意外死亡或损失， 全部计人结果分析。 组和对照组，发现该复合物相比对照组而言能有效地与周围组织融合 并维持兔软骨的正常代谢和功能，从而非常有效地修复兔关节软骨的 ５４ ・Ｉ临床研冤・ Ａｕｇｕｓｔ ２Ｕ１ ７，ＶＯＩ．１ ５，ＮＯ．２２ 品管圈活动在新生儿蓝光治疗安全管理中的应用 张娟 袁瑞琴 罗 丽 曹爱芬 陈丽莲 （南方医科大学附属深圳妇幼保健院ＮＩｃｕ，广东深圳５１８０２８） 【摘要】目的探讨品管圈活动在新生儿蓝光治疗安全管理中的应用。方法成立品管圈小组，确立“降低新生儿蓝光治疗护理缺陷的发生率” 为活动主题，进行现状把握、目标设定、要因分析、对策拟定，应用ＰＤＣＡ循环原则实施各项对策。结果开展品管圈活动后，新生儿蓝 光治疗中的护理缺陷发生率从１６．９３％降低到４．２７％，活动前后比较差异具有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１），护理人员团队精神和综合能力以及 积极性和主动性的提高。结论开展品管圈活动降低了新生儿蓝光治疗护理缺陷发生率，提高护理人员积极性、创造性、主动性及团队精神。 【关键词】新生儿；蓝光治疗；品管圈；安全管理 中图分类号：Ｒ７２２．１ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１９４（２０１７）２２一ｏｏ５４—０３ 品管圈（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｃｉｒｃｌｅ，ＱＣＣ）是由相同、相近或互补的 工作场所人员自动自发组成数人一圈的活动团队，通过全体合作，集 思广益，按照一定的活动程序，或用科学统计工具及品管手法，来解 决工作现场、管理、文化等方面所发生的问题及课题Ⅲ。光疗是治疗 新生儿高胆红素血症的一种疗效肯定而简单易行的方法。但在光疗过 程中容易发生眼罩松脱、红臀、皮肤损伤及仪器使用不当等护理问 题，不仅增加患儿痛苦及护理工作量，还可能引起护患纠纷 】，理想 级、可行性、迫切性、圈能力４个评分项目采用“５、３、１”的评 分汇总出分，依照得分高低进行排序，最后选定“降低新生儿蓝光治 疗护理缺陷的发生率”为本次品管圈活动的主题。 １．２．３拟定活动计划：根据活动步骤拟定活动计划表并绘制成甘特图， 分工明确，互相协作，使用头脑风暴、柏拉图、鱼骨图、雷达图等品 管工具和品管手法进行活动。本次ＱＣＣ活动实施周期为２０１５年８月至 ２０１６年１月，共２４周。每月召开圈会１次，进行质量分析、成果讨论 的安全管理，不仅能减少患儿痛苦，还可以提高护理工作效率。为 保证护理安全，不断提高服务质量，规避护理风险 ］。针对此问题， 和措施的修改。此外还建立了品管圈微信圈以及ＱＱ群。１名副主任 护师担任监督工作，监督ＱＣＣ括动全过程的质量管理，进行持续质量 改进。 １．２．４现状把握：新生儿蓝光治疗护理缺陷发生率＝（护理缺陷频次／蓝 光治疗人次）×１００％。对照组３１３人次，发生护理缺陷５３例次，缺陷 发生率为１６．９３％，护理缺陷各项发生率统计结果见表１，根据表１的结 ２０１５年８月至２０１６年１月，本科将品管手法应用于“降低新生儿蓝光治 疗护理缺陷的发生率”的主题中，取得一定效果，报道如下。 １对象与方法 ， １．１研究对象：以２０１ ５年９月未实施品管圈管理前需要光疗的３１３例 新生儿为对照组（ＱＣＣ改善前），其中早产儿１ ８６例，足月儿１２７ 果绘制柏拉图（图１），根据８０／２０法则明确改善重点为眼罩固定不到 位、灯管累计时间不规范、新生儿皮肤损伤。 表１新生儿蓝光治疗护理缺陷统计表 项目 例数缺陷发生率（％）百分率（％）累计百分率（％） 例。２０１５年１ １月实施品管圈管理后需要光疗的３５１例新生儿为试验组 （Ｏｃｃ改善后），其中早产）Ｌ２０４例，足月ＪＬＩ４７例。高胆红素血症患 儿均无窒息史及其他并发疾病。两组患儿在性别、日龄、体质量、黄 疸严重程度上均无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５），具有可比性。 ｌ－２研究方法 １．２．１品管圈组建：由科室９名护士自愿组成，选举圈长１名，负责整个 活动的策划与组织。护士长任辅导员，承担品管圈活动运作过程的辅 导和支持角色。征集圈名、圈徽，确立圈名为圆圆圈，圆圆即， 完善。降低新生儿蓝光治疗护理不良事件的发生率，使我们的工作圆 满完善，这是我们圆圆圈的目标。 １．２．２主题选定：全体圈员通过头脑风暴法，提出５个圈主题。根据上 基金项目：深圳市卫生计生系统立项课题（编号：２０１ ５０７０５６） １．２．５目标设定：目标值：现状值一改善值：现状值一（现状值 ×改善重点×圈员能力）。目标值＝１６．９３％一（１６．９３％ｘ ８６．８％ ×８２％）＝４．８８％，降幅＝（现状值一目标值）／现状值×１０Ｏ％： （１６．９３％・４．８８％）／１６．９３％＝７１．１５％。 １．２．６要因解析：各位圈员通过头脑风暴，利用“鱼骨图”进行分析， 损伤，这表明应用骨髓间充质干细胞复合关节软骨脱细胞基质可以用 于修复兔软骨损伤。 参考文献 ［４］张志勇．转导人端粒酶逆转录酶基因致人骨髓间充质干细胞永生 化的研究【Ｄ】．大连：大连医科大学，２００９． ［５】穆晓红，赵子义，徐林，等．密度梯度离心法体外培养骨髓问充质干 细胞的分化能力［Ｊ］．中国组织工程研究，２０１１，１５（２７）：４９５５—４９５８． ［６］武天佑，夏亚一，王栓科，等．关节软骨脱细胞支架材料的制备［Ｊ】．中 国组织工程研究，２００Ｚ１１（１８）：３６０１－３６０３． ［１】徐敬，赵建 徐海栋，等．关节软骨损伤修复研究进展［Ｊ］．临床与病 理杂志，２０１５，３５（３）：４５５—４６１． ［２】 阮征，尹庆水，张余．关节软骨损伤修复技术的研究与进展［Ｊ］．中国 组织工程研究，２０１４（２９）：４７２４—４７２９． ［７］杨强，彭江，卢世璧，等．软骨脱细胞基质多孔支架与骨髓基质干 细胞体外构建组织工程软骨的研究【Ｊ］．中华医学杂志，２０１１，９１ （１７）：１１６１－１１６６． 【３３］ 王岩，李德华．骨髓间充质干细胞复合多肽凝胶及成软骨生成因 子修复兔关节软骨缺损【Ｊ］－中国组织工程研究，２０１５，１９（１）：３０－３６．
