ｗｗｗ·ｚｇｙＳ·ｏｒｇ 研究报告 ＨＰＬＣ法测定制痂酊中儿茶素和表儿茶素的含量 唐丽琴 张善堂 刘圣 方焱 陈象青 吴玲梅 （安徽医科大学附属省立医院药剂科合肥２３０００１） 摘要 目的：建立高效液相色谱法同时测定制痂酊中儿茶素和表儿茶素的含量。方法：色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ 柱（２５０ｒａｍ×４． ６ｍｍ，５ ｍ），流动相：２．２％冰醋酸一乙腈（９０：１０），流速：０．８ｍｌ·ｍｉｎ～，检测波长：２８０ｎｍ，柱温：３５￣Ｃ。结果：儿茶素和表儿茶素 分别在０．１０～０．８０ｍｇ·ｍｌ～、０．０１—０．２０ｍｇ·ｍｌ 之间呈良好的线性关系，平均回收率分别为１０１．１％（ＲＳＤ＝０．９５％，ｎ：６）和 １００．２％（ＲＳＤ＝１．９０％，ｎ＝６）。结论：该方法快速、定量准确，可用于制痂酊的质量控制。 关键词制痂酊；儿茶素；表儿茶素；ＨＰＬＣ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０４９Ｘ（２００９）０６－０７５４－０２ 中图分类号：Ｒ９２７．２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｔｅｃｈｉｎ ａｎｄ Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｏｓｃａｂ Ｔｉｎｃｔｕｒｅ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｔａｎｇ Ｌｉｑｉｎ，Ｚｈａｎｇ Ｓｈａｎｔａｎｇ，Ｌｉｕ Ｓｈｅｎｇ，Ｆａｎｇ Ｙａｎ，Ｃｈｅｎ Ｘｉａｎｇｑｉｎｇ，Ｗｕ Ｌｉｎｇｍｅｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ａｎｈｕｉ Ｐｒｏｖｉｎ— ｃｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｏｉｆ ２３０００１，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｔｅｃｈｉｎ ａｎｄ ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｏｓｃａｂ ｔｉｎｃｔｕｒｅ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄ：１ｔｌ１ｅ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５Ｉ．ｚｍ）．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ２．２％ａｃｅ ａｃｅ— ｒｕｍ—ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（９０：１０）ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ０．８ｍｌ·ｍｉｎ～．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ａｔ ２８０ｎｍ ａｎｄ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ０．１０—０．８０ｍｇ·ｍｌ～ｆｏｒ ｃａｔｅｃｈｉｎ ａｎｄ ０．０１—０．２０ｒａｇ·ｍ１～ｆｏｒ ｅｐｉｃａｔｅ— ｃｈｉｎ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｃａｔｅｅｈｉｎ ａｎｄ ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｗｅｒｅ １０１．１％（ＲＳＤ＝０．９５％，ｎ＝６）ａｎｄ １００．２％（ＲＳＤ＝ １．９０％，ｎ＝６），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｏｒｆ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃａｔｅｃｈｉｎ ａｎｄ ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ａｎｄ ｍａｙ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｗａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｏｓｃａｂ ｔｉｎｃｔｕｒｅ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ Ｍｅｄｉｃｏｓｃａｂ ｔｉｎｃｔｕｒｅ；Ｃａｔｅｃｈｉｎ；Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ：ＨＰＬＣ 制痂酊为医院制剂，由儿茶、黄柏、黄芩和冰片四味中药 经乙醇浸提制成的中药复方酊剂，具有收湿、敛疮、？肖炎止痛 品贮备液（儿茶素１．６１ｍｇ·ｍｌ‘。、表儿茶素０．４０ｍｇ·ｍｌ。。）。 ２．３供试品溶液的制备 之功效，临床用于Ｉ度、Ⅱ度烧伤、烫伤等，使创面形成药痂， 保持干燥，防止细菌污染和焦痂溶解 。现行规范中没有建 立定量测定的方法，文献也未见报道。为了更好地控制该制 剂的质量，本文采用ＨＰＬＣ法同时测定制痂酊中主要药物儿 茶的有效成分儿茶素和表儿茶素，建立该制剂的定量测定方 法，以期为临床提供更加安全有效的药物。 １仪器与试药 精密量取制痂酊２ｍｌ于蒸发皿中蒸干，用适量甲醇溶 解，过滤，再转移到５０ｍｌ量瓶中，定容，摇匀，用０．４５１ｘｍ微 孔滤膜过滤，作为供试品溶液。 ２．４ 阴性供试品溶液的制备 取处方组分中除儿茶外的其余成分制成不含儿茶的阴 性样品，按“２．３”项下的制备方法得阴性供试品溶液。 ２．５ 系统适用性试验 岛津ＬＣ一６Ａ型高效液相色谱仪（ＳＰＤ－６ＡＶ紫外可见检 测器，ＨＳ色谱数据工作站４．０＋）。儿茶素对照品（中国药 品生物制品检定所，批号：８７７－２００００１），表儿茶素对照品（中 国药品生物制品检定所，批号：１１０８７８—２００１０２），制痂酊（安 徽医科大学附属省立医院制剂室，批号：０８０１２１，０７０６１４， ０７０７１０），冰醋酸为分析纯，甲醇和乙腈为色谱纯，水为二次 重蒸馏水。 ２方法与结果 ２．１ 色谱条件 分别用儿茶素和表儿茶素混合标准品、制痂酊样品及阴 性供试品溶液进样，色图谱见图１。表明阴性供试品溶液对 测定结果无干扰。 Ａ Ｂ 色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃｌ８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ ｍ）；流动相： ２．２％冰醋酸一乙睛（９０：１０），流速：０．８ｍｌ·ｍｉｎ一，检测波长： ２８０ｎｍ，柱温：３５￣Ｃ，进样量：２０ ｌ。 ２．２对照品溶液的制备 ０ ２ ４ ６ ８ １０ ｌ２ Ｉ４Ｖｍｉｎ Ｃ Ａ．混合对照品Ｂ．样品Ｃ．阴性供试品 精密称取儿茶素对照品１６．１ｍｇ，表儿茶素对照品４．０ ｍｇ，加甲醇溶解并转移到１０ｍｌ量瓶中，定容，摇匀，作为对照 作者简介：唐丽琴，女，博士，副主任药师，主要从事中药的质量控制及Ｉ临床药学工作。１．儿茶素２．表儿茶素 图１ ＨＰＬＣ色谱图 Ｔｅｌ：（０５５１）２２８３３７８ Ｅ—ｍａｉｌ：ｔｕｌｃｙｌ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ ７ ５ 中国药师 ２００９年第１２卷第６期 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔ ２００９，Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．６ ２．６线性关系考察 ２．１１最低检测限测定 分别吸取一定量的儿茶素和表儿茶素对照品贮备液，加 甲醇稀释配成｝昆合对照品溶液，其中儿茶素浓度为０．１０， ０．２０，０．４０，０．６０，０．８０ｍｇ·ｍｌ‘。，表儿茶素浓度为０．０ｌ，０．０２， ０．０５，０．１０，０．２０ｍｇ·ｍｌ。依次进样２０ ｌ，以峰面积（Ａ）对对 照品溶液系列浓度（ｃ）进行回归，得儿茶素回归方程Ａ＝８× １０。Ｃ＋２４０ ４４７将混合对照品溶液稀释测定，测得信噪比为３：１时，儿 茶素和表儿茶素的最低检测浓度分别为０．０２ｌａ，ｇ·ｍｌ～、０．０１ ｇ·ｍｌ＿。。 ２．１２样品测定 ｒ＝０．９９９ ２，线性范围为０．１０～０．８０ｒａｇ· 按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，测定了３批 样品中儿茶素和表儿茶素的含量，结果见表２。 表２样品含量测定结果 ９ ６ ７ １ ０ ０ Ｏ ４ ８ ７ ７ ７ 叭叭 ∞叭 ∞％∞卯∞∞ ｍｌ～；表儿茶素回归方程Ａ＝８×１０。Ｃ＋２ ６３７，ｒ＝０．９９９ ９，线 性范围为０．０ｌ～０．２０ｒａｇ·ｍｌ～。 ２．７精密度试验 取混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样６次，以 儿茶素和表儿茶素峰面积计算，ＲＳＤ分别１．６６％，０．８４％。 ２．８稳定性试验 取供试品溶液（批号０８０１２１）在０，１，２，４，６，２４ ｈ分别进 样２０１．ｄ，计算儿茶素和表儿茶素峰面积的ＲＳＤ分别为 ０．８０％和０．８３％，表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。 ２．９重复性试验 ３讨论 对于儿茶素和表儿茶素的测定，大量文献选择０．０４ｍｏｌ· Ｌ 枸橼酸溶液一Ⅳ，Ⅳ一二甲基甲酰胺一四氢呋喃（４０：８：２）作为 流动相 ，但由于考虑到四氢呋喃严重刺激嗅觉且毒性较 大，因此没有选择此流动相。试验采用水一乙腈（９０：１０）的流 取同一批号（批号０８０１２１）样品５份，按样品处理方法， 进样测定，儿茶素和表儿茶素的平均含量分别为１０．５９ ｍｇ· ｍｌ 和１．３３ ｍｇ·ｍｌ，ＲＳＤ分别０．８６％和３．５％。 ２．１Ｏ加样回收率试验 动相，并加入冰醋酸后，儿茶素和表儿茶素能与杂质较好分 离，故最终确定本实验的流动相为２．２％冰醋酸一乙腈（９０： ｌ０） 取已知含量的样品（批号０８０１２１）６份各０．２ｍｌ，加入相应 参考文献 量的儿茶素和表儿茶素对照品贮备液，按供试品溶液的制备 方法处理并定容至１０ｍｌ后测定，计算回收率，结果见表１。 表１回收率实验结果（ｎ＝６） １安徽省卫生厅安徽省医院制剂规范［Ｓ］．１９９９．７３－７４ ２宋粉云，毋福海，钟兆健．ＨＰＬＣ测定万应胶囊中儿茶素、表儿茶素和盐酸 小檗碱的含量［Ｊ］．中成药，２００６，２８（６）：８０６—８１０ ３王钢力，于健东，田金改，等．儿茶药材化学成分分析——反相高效液相色 检测指标篡譬 人 得 Ｌ ａｒｇ）ｍＬ ｇ）ｍｇ ， Ｌ 平 率 ＲＬ Ｌ％％ＪＳＤ 儿茶素 ２ ｌ１８ ２．１１８ ２．１】８ ２．１１８ ２．１１８ ２．１１８ １．８７５ ２．Ｏ０ｏ ２ １２５ ４．０２９ ４．１４９ ４．２３６ 谱法测定儿茶中儿茶素和表儿茶素的含量［Ｊ］．药物分析杂志，１９９９，１９ （２）：８８－９０ ２．】２５ ２ ２５０ ２．５ｏｏ ０．２３０ ０ ２４４ ０ ２５９ ０ ２５９ ０．２７５ ０．３０５ ４．２４５ ４．３９１ ４．６６９ ４钟世红，何宇新，李羿．高效液相色谱法测定黏膜溃疡含片中儿茶素和表儿 茶素构含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（６）：１４２１—１４２２ ５颜学伟．高效液相色谱法测定万应锭中儿茶素和表儿茶素含量［Ｊ］．中国 中医急症，２００５，１４（１１）：１０９８—１１０８ 表儿茶素 ０．２６６ ０．２６６ ０．２６６ ０ ５０３ ０．５０６ ０ ５２７ ０．５ｌ９ （２００８—１２—１５收稿２００９－０１－０８修回） ０．２６６ ０．２６６ ０ ５４３ ０．５７３ ０．２６６ 正交试验法优选复方决明子胶囊的提取工艺 雷宁 王玲 孙健姿 马萍 兰安杰 （第二炮兵总医院药剂科摘北京１０００８８） 要 目的：优选复方决明子胶囊的提取工艺。方法：采用ｋ（３ ）正交试验，以处方出膏率和大黄酚的提取率为指标，以 乙醇浓度、加醇量和提取时间为考察因素，筛选复方决明子胶囊最佳醇提取工艺；以出膏率为指标，以溶媒用量、提取次数和 提取时间为考察因素，筛选复方决明子胶囊的最佳水提取工艺条件。结果：复方决明子胶囊最佳乙醇提取工艺条件为以５５％ 乙醇为提取溶媒，提取２次，每次加液量１０倍，第一次２．５ｈ，第二次２．Ｏｈ；最佳水提取工艺条件为加１０倍量水煎煮２次，第一 次３ｈ，第二次２ｈ。结论：优选试验得到的提取工艺稳定、可行，适用于生产实际。 关键词复方决明子胶囊；正交试验；提取工艺；大黄酚 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０４９Ｘ（２００９）０６－０７５５－０４ Ｔｅｌ：（０１０）６６３４３２５７ Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｌｙｚｅｂｒａ＠１６３ 中图分类号：Ｒ２８４．２ 作者简介：雷宁，女，博士，主管药师。从事巾药及天然药物药效物质基础与质量标准研究。７