3%过氧乙酸配制方法在5L三角烧瓶中，把2250g醋酸酐，在水浴上温热至35~40℃。换用25~30℃水浴，在搅拌下在1h内滴入过氧化氢（35%~30%）500g，维持温度在40℃以下。在室温放置过夜，所得溶液中含过氧乙酸6%~9%。
若需要浓过氧乙酸溶液，可用下法制备：在10g冰醋酸和0.11mL浓硫酸的混合液中，边搅拌边加入9.1g90%过氧化氢，温度维持在22~23℃。放置4h后，过氧乙酸含量可达44%；12~15h后达46%。
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