一、所需仪器设备及消耗品
剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200、100、50ml）、量筒（1000、500、100、
10ml）、烧杯（1000、500、200、100ml）、pH试纸、电子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（1套）、枪头（1ml、200ml、20μl）、枪头盒、离心管（1.5ml）（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片 二、所需化学药品及试剂
CTAB、NaCl、EDTA-Na2·2H2O、Tris、冰乙酸、硼酸、β-巯基乙醇、NaAc、氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（EB）、RNase、NaOH、HCl（浓）、ddH2O 三、各种缓冲液的配制
（一）2%CTAB提取缓冲液（300ml）（高压灭菌）
4mol/L的NaCl 35ml×3=105ml 1mol/L的Tris-HCl 10ml×3=30ml ×3=12ml
CTAB 2g×3=6g
（二）1×TE（母液pH8.0）（50ml）（高压灭菌）
1mol/L的Tris-HCl（pH8.0） 500μl 0.5mol/L的EDTA（pH8.0） 100μl 最后加ddH2O定容到 50ml
工作液为×TE（45ml灭菌的ddH2O中，加入5ml已
灭菌的1×TE）
（三）4mol/L的NaCl（150ml）（高压灭菌）
35.055g的NaCl，加ddH2O120ml溶解，再加水定容到150ml
（四）1mol/L的NaCl（400μl）（用于配制RNase贮存液） 取4mol/L的NaCl（已灭菌）100μl，加300μl灭菌的ddH2O.
（五）3mol/L的NaAc溶液（pH5.2）（50ml）（高压灭菌）
NaAc·3H2O
加ddH2O 30ml 加ddH2O定容到 50ml
（六）RNase贮存液（10mg/ml）（1ml）
1mol/L的Tris-HCl（pH7.5） 10μl 1mol/L的NaCl 15μl RNase 10mg 沸水浴15~20min
（七）EB贮存液（1mg/ml）
EB 30mg ddH2O 30ml
磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保
管于室温.
μg/ml（30ml加15μl、40ml加20μl）
（八）10×TBE缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌）
Tris碱 54g
0.5mol/L的EDTA（pH8.0） 20ml
以上溶于400ml的ddH2O中，在定容到500ml 工作液为1×TBE或×TBE
（九）6×上样缓冲液（4℃保管）
0.25%的溴酚蓝（2.5mg/1ml 40%（w/v）的蔗糖水溶
液）
40%（w/v）蔗糖水溶液（2g/5ml的ddH2O，加热溶
解，注：温度不能太高）
（十）1mol/L的HCl溶液（不用灭菌）
8.62 ml的浓盐酸，加灭菌ddH2O 91.38ml，混匀，室温保管（100ml）.
（十一）5mol/L的NaOH溶液（50ml，10g的NaOH溶于50ml灭菌的ddH2O中）（不用灭菌）
200g的NaOH，溶于灭菌的ddH2O中，定容至
1000ml
（十二）1mol/L的Tris-HCl（pH8.0）（100ml）（高压灭菌）
80ml的ddH2O
加浓盐酸调节pH值至8.0（年夜约加4.2ml）
（十三）0.5mol/L的EDTA（pH8.0）（50ml）（高压灭菌）
2H2O 2·
1g的NaOH 磁力搅拌器剧烈搅拌 40ml的ddH2O
DNA定量用紫外分光光度计法，1OD260≈50μg/ml双链DNA.
PCR（聚合酶链反应）
一、所需仪器设备及消耗品
冰箱（4℃、20℃）、高压灭菌锅、离心机、移液器（1套）、枪头、枪头盒、PCR管（包括盒和架）、PCR仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片
二、所需化学药品及试剂
质粒（阳性对比）、引物（1、2）、4×dNTP、DNA模板、buffer（MgCl2）、TaqDNA聚合酶、ddH2O、琼脂糖、DNA标准样品（DNA ladder）、溴化乙锭（EB）、5×TBE电泳缓冲液（Tris、硼酸、EDTA） 三、PCR反应体系与反应法式 仅供参考
成份 无离子水 缓冲液（buffer）
MgCl2 4×dNTP
母液浓度
10× 25mmol/L 2mmol/L
各成份加入量（μl/20μl）
2 2
各成份终浓度 或含量
1× 1.5 mmol/L 0.2 mmol/L
引物 TaqDNA聚合酶 模板DNA
5pmol/L 5U/μl 20ng/μl
2
mol/L 3U 50ng
把持顺序：
①水、4×dNTP混合
② buffer、taqDNA聚合酶混合，①、②混合 ③ 加入引物
④混匀、分装PCR管
⑤向每个PCR管加入模板DNA
PCR扩增反应法式：
94℃预变性3~5min.
进入循环：94℃变性30s→56℃退火30~45s→72℃延伸1~2min，30~36个循环.
循环结束后再72℃延伸7min.
外源脱水应答转录因子DREB基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗旱生理效果
Induced Expression of DREB Transcriptional Factor and Study on Its Physiological Effects of Drought Tolerance in Transgenic Wheat
成份 无离子水 缓冲液（buffer）
4×dNTP 引物1 引物2 TaqDNA聚合酶 模板DNA
母液浓度
10× 2mmol/L
5U/μl 20ng/μl
各成份加入量（μl/25μl）
13？ 2 5？ 5？ 0.2？ 1？
各成份终浓度 或含量
1× 0.2 mmol/L 1μmol/L？ 1μmol/L？
1U 50ng
PCR扩增反应法式：
94℃预变性5min.
进入循环：94℃变性45s→45℃退火45s→72℃延伸1min，35个循环.
循环结束后再72℃延伸10min.
μmol/L，≥μmol/L时，特异性降低或形成引物二聚体，≤μmol/L时，降低产量.
PCR反应中每种dNTP的终浓度为20~200μmol/L.
所用引物浓度是5μmol/L吗？
PCR反应时，每个引物的终浓度是几多？4×dNTP的终浓度是几多？TaqDNA聚合酶的终浓度是几多？模板DNA的终浓度是几多？
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