・ ４６２ ・ 山西医药杂志２０１３年４月第４２卷第４期上半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｐｒｉｌ ２０１３，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．４ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ ・药物研究・ 高效液相色谱法在黄芩中黄芩苷含量测定的应用研究 内蒙古包钢医院（０１４０１０） 要利明 朱永蒙赵晓龙 黄芩为唇形科植物黄芩（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ Ｇｅｏｒ— ｇｉ）的干燥根，是一种疗效确切的常用中草药，具有清热燥 湿、泻火解毒、止血、安胎等作用ｌ＿１］。药理研究证明黄酮类 化合物是黄芩根的主要有效成分。目前从黄芩中已发现４１ 种黄酮类化合物，其中含量较高并具有明显药理作用的是 黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和汉黄芩苷ｌ２］。目前对黄芩的药 理研究已经很广泛，本文采用了高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法分 析了黄芩中黄芩苷的含量，为有效控制该药材质量以及合 理利用该药用植物资源提供参考。 １仪器与试药 Ｖｅｒｔｅｘ ＳＴＩ ５０１高效液相色谱仪，５３５型紫外检测器（ 美国生物公司）；黄芩样品４批（２０１１０８１５，２０１１１２３１， ２０１２０７２２）；黄芩苷对照品（批号：１２０７１６－２００８１５，纯度 ９９．２ ）由中国药品生物检定所提供；水为蒸馏水，其他试 剂均为分析纯。 ２方法与结果 ２．１对照品溶液的制备 分别取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀 释制成ｏ．１ ｍｇ／ｍＩ 的溶液，作为对照品溶液。 ２．２供试品溶液的制备 取黄芩药材粉末（过６０目筛）０．２ ｇ，精密称定，置１００ ｍＩ 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，称定质量，超声提取４５ ｍｉｎ，取出，放冷，用甲醇补足质量，摇匀，滤过，取续滤液２ ｍＬ置５ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜 （Ｏ．４５“ｍ）滤过，即得供试液。 ２．３色谱条件及系统适用性试验 色谱柱为Ｋｒｏｍｓｔａｒ Ｃ１８柱（２５０ １Ｔｉｍ×４．６ ｍｍ，５ ｕｍ）； 甲醇一水一磷酸（４７：５３：０．２）为流动相。检测波长２８０ Ｅｌｍ； 体积流量１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３Ｏ℃；进样量ｌ０ Ｌ；理论板数 按黄芩苷蜂计算应约为２×１Ｏ ，与其他蜂的分离度均大于 １．０。所有组分均在３０ ｍｉｎ内被检测完。 ２．３．１ 线性关系试验：精密吸取黄芩苷对照品溶液１．０， ２．０，４．０，６．０，８．０，９．０ ｍｌ 置１Ｏ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，各进样１Ｏ Ｉ ，记录色谱图，测定各浓度黄 芩苷的峰面积，各对照品溶液的峰面积（ｙ）对浓度（Ｘ）作线 性回归，得回归方程为ｙ一１．０５１ ８１８ ６×１０６Ｘ＋８ １４１．３８２ ６，ｒ一０．９９９ ６。故本品浓度在０．１～０．９ ｍｇ／ｍＬ的范围内 与峰面积呈良好的线性关系。 ２．３．２精密度试验：取对照品溶液，连续进样６次，测定 通信作者：赵晓龙 峰面积，相对标准偏差（ＲＳＤ）为０．８０ ，表明精密度良 好。 ２．３．３重复性试验：取黄芩药材（批号２０１２Ｏ７２２）按照供试 品溶液制备方法制备样品液６份，照样品测定法项下方法 测定，平均含量为９９．９ ，ＲＳＤ为０．５２ ，方法重复性良 好。 ２．３．４稳定性试验：取黄芩药材（批号２０１２０７２２）按照供试 品溶液制备方法制备样品液，分别于０，４，８，１２，１６，２４ ｈ测 定峰面积，ＲＳＤ为０．００５ ，表明测定溶液在２４ ｈ内稳定。 ２．３．５回收率试验：精密称取已知含量的黄芩药材（批号 ２０１２０７２２）０．２ ｇ，加入黄芩苷对照品适量，依２．２项下供试 品溶液制备方法制备，按上述色谱条件进样分析，计算回收 率，结果见表１。 表１黄芩药材加样回收率 ２．３．６样品测定：取黄芩饮片样品按２．２项下的方法制备 供试品溶液，每一批号的供试品平行制备３份，按上述色谱 条件测定峰面积，用外标法以蜂面积计算样品中黄芩苷的 含量。结果见表２。 表２不同批次黄芩药材的含量 ３讨 论 检测波长及流动相的筛选：通过查阅文献资料，黄芩含 有多种黄酮，采用色谱柱多采用ＯＤＳ Ｃ 柱，流动相：异丙 醇一甲醇一３ 醋酸（５：３０：６５）或甲醇一水一磷酸（４７：５３： ０．２）或０．０２ ｍｏｌ／Ｌ 磷酸二氢钾一甲醇（５０：５０）等系统，实 验结果证明甲醇一水一磷酸（４７：５３：０．２）系统中，黄芩苷得 到完全分离，可为黄芩中黄酮类成分含量测定提供参考。 参考文献 ［１］潘鹏飞，孙飞，李延雪，等．ＨＰＬＣ法同时测定黄芩中黄芩苷、黄 芩素、汉黄芩素的含量．中国药师，２０１２，１５（１）：７５—７６． Ｅ２；刘雄，高建德．黄芩研究进展．甘肃中医学院学报，２００７，２４ （２）：４６—４８． （收稿日期：２Ｏ１２—１０－０９） 作者简介：要利明，男，１９６９年１０月生，主管检验师，内蒙古 包钢医院，Ｏ１４０１０