附录 A
（资料性附录）
醋酸氯⼰定、葡萄糖酸氯⼰定、盐酸氯⼰定测定⽅法A.1 ⽅法⼀：⾼效液相⾊谱法A.1.1 适⽤范围
适⽤于含醋酸氯⼰定、葡萄糖酸氯⼰定、盐酸氯⼰定的单⽅和复⽅消毒剂。A.1.2 原理
样品经流动相(0.02 mol/L磷酸⼆氢钾溶液 pH=2.5 +⼄腈=65+35)超声波提取，采⽤⾼效液相⾊谱-⼆极管阵列检测器测定，峰⾯积外标法定量。A.1.3 仪器
A.1.3.1 ⾼效液相⾊谱仪，具⼆极管阵列检测器。A.1.3.2 电⼦天平，感量为0.1 mg。A.1.3.3 超声波清洗器。A.1.4 试剂
除⾮另有说明，本⽅法所⽤试剂均为分析纯,实验⽤⽔为GB/T 6682规定的⼀级⽔。A.1.4.1 醋酸氯⼰定（C22H30Cl2N10?2C2H4O2，CAS号：56-95-1）标准品。A.1.4.2 磷酸⼆氢钾（KH2PO4）。A.1.4.3 85% 磷酸（H3PO4）。A.1.4.4 ⼄腈（CH3CN）:⾊谱纯。A.1.5 分析步骤
A.1.5.1 流动相、提取液的制备
称取2.7 g磷酸⼆氢钾，放⼊1000 mL量筒中，加⼊约950 mL⽔溶解后，加⼊1.5 mL 85%磷酸，然后⽤⽔定容⾄1000 mL，混匀，得到流动相A相 (pH=2.5)，B相为⼄腈。
量取流动相A相650 mL，加⼄腈350 mL，混合均匀，得到提取液。A.1.5.2 标准溶液的制备
精密称取醋酸氯⼰定标准品20 mg，⽤流动相稀释⾄50 mL，得到400 mg/L标准溶液。A.1.5.3 标准曲线的制备
将标准溶液⽤流动相稀释成10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L 的标准系列，10 µL进样测定。A.1.5.4 ⾊谱参考条件
⾊谱柱: C18柱(4.6 mm ×250 mm, 5 µm)；流动相: A 相+ B 相= 65+35；流速: 1.0 mL/min ；进样量:10 µL ；柱温: 30℃；波长扫描200 nm ～400 nm ；测定波长: 260 nm ；以保留时间和紫外光谱图谱定性，以峰⾯积外标法定量。A.1.5.5 样品测定
称取或量取样品适量于50 mL 容量瓶中，加提取液40 mL ，超声波提取20 min ，定容⾄50mL ，过0.45 µm 滤膜后，进样测定。⾊谱图见图A.1。A.1.6 结果计算
根据标准曲线，计算样品中醋酸氯⼰定含量，计算公式见式（A.1）。1000=
M V X ρ........................................（A.1） 式中： X ——样品中醋酸氯⼰定的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg 或g/L ）；ρ——由标准曲线得到样品溶液的醋酸氯⼰定的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ）； V ——定容体积，单位为毫升（mL）；
M ——样品量，克或毫升（g 或mL ）。
注：葡萄糖酸氯⼰定含量测定可以⽤醋酸氯⼰定做标准品，并将结果乘以1.4352。盐酸氯⼰定含量测定可以⽤醋酸氯⼰定做标准品，并将结果乘以0.9246。A.1.7 精密度
在重复性条件下获得的两次独⽴测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。A.2 ⽅法⼆：滴定法(本⽅法依据《中华⼈民共和国药典》中醋酸氯⼰定的测定⽅法)A.2.1 适⽤范围
适⽤于含醋酸氯⼰定的单⽅消毒剂。A.2.2 原理
样品⽤丙酮和冰醋酸溶解，加甲基橙饱和丙酮溶液，⽤⾼氯酸滴定液滴定，甲基橙指⽰液显橙⾊时停⽌滴定，通过⾼氯酸滴定液使⽤量，计算醋酸氯⼰定含量。A.2.3 仪器
A.2.3.1 电⼦天平，感量为0.1 mg 。A.2.4 试剂
除⾮另有说明，本⽅法所⽤试剂均为分析纯,实验⽤⽔为GB/T 6682规定的⼀级⽔。A.2.4.1 ⾼氯酸（ClHO 4）标准滴定溶液（0.1mol/L ）。A.2.4.2 丙酮（CH 3COCH 3）。A.2.4.3 冰醋酸（CH 3COOH ）。
A.2.4.4 甲基橙（C 14H 14N 3NaO 3S ）。A.2.5 样品测定
精密称取或量取样品适量，加丙酮30 mL 与冰醋酸2 mL ，振摇使溶解后，加甲基橙的饱和丙酮溶液0.5 mL ～1 mL ，⽤⾼氯酸滴定液（0.1mol/L ）滴定⾄溶液显橙⾊，并将滴定的结果⽤空⽩试验校正。
每1 mL ⾼氯酸滴定液（0.1mol/L ）相当于31.28mg 的C 22H 30Cl 2N 10·2C 2H 4O 2。A.2.6 结果计算
样品中醋酸氯⼰定含量，计算公式见式（A.2）。M
V V C X 28.31)(0?-?=........................................（A.2） 式中：
X ——样品中醋酸氯⼰定的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg 或g/L ）；C ——标准滴定溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/L ）；V ——试样测定所消耗的标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL ）；V 0——相应的空⽩测定所消耗的标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL ）；
M ——样品量，克或毫升（g 或mL ）。A.2.7 精密度
在重复性条件下获得的两次独⽴测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
A.3 ⽅法三：紫外分光光度法(本⽅法依据《中华⼈民共和国药典》中醋酸氯⼰定软膏的测定⽅法)A.3.1 适⽤范围
适⽤于软膏型或液体制剂型含氯⼰定类（包括醋酸氯⼰定、葡萄糖酸氯⼰定、盐酸氯⼰定）的单⽅消毒剂。A.3.2 原理
样品中的醋酸氯⼰定经氯仿溶解基质，再⽤1.5 mol/L 的醋酸溶液提取，在波长260 nm 处测定吸光度值定量。A.3.3 仪器
A.3.3.1 紫外分光光度计。
A.3.3.2 电⼦天平，感量为0.1 mg 。A.3.4 试剂
除⾮另有说明，本⽅法所⽤试剂均为分析纯,实验⽤⽔为GB/T 6682规定的⼀级⽔。A.3.4.1 醋酸氯⼰定（C 22H 30Cl 2N 10?2C 2H 4O 2，CAS 号：56-95-1）标准品。A.3.4.2 氯仿（CHCl 3）。A.3.4.3 冰醋酸（H 3PO4）。A.3.5 分析步骤A.3.5.1 标准溶液测定
精密称取醋酸氯⼰定标准品约10 mg ，置100 mL 容量瓶中，加1.5 mol/L 醋酸溶液溶解并稀释⾄刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL 量瓶中，⽤⼄醇稀释⾄刻度，在260 nm 的波长处测定吸光度。A.3.5.2 样品测定
精密称取样品适量（约相当于醋酸氯⼰定10 mg ），置分液漏⽃中，加微温氯仿30 mL ，振摇使基质溶解，⽤1.5 mol/L 醋酸溶液提取5次（20 mL 、20 mL 、15 mL 、15 mL 、15 mL ），合并酸液于100 mL 量瓶中，⽤1.5 mol/L 醋酸溶液稀释⾄刻度，摇匀，精密量取5 mL ，置 50 mL 量瓶中，⽤⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，在260 nm 的波长处测定吸光度。液体剂型醋酸氯⼰定消毒液，直接⽤1.5 mol/L 醋酸溶液稀释后，再⽤⼄醇稀释，测定吸光度。A.3.6 结果计算
样品中醋酸氯⼰定含量，计算公式见式（A.3）。M
A m A X ??=
12........................................（A.3） 式中： X ——样品中醋酸氯⼰定的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg 或g/L ）；m ——醋酸氯⼰定标准品的质量，单位为毫克（mg ）；A 1——醋酸氯⼰定标准溶液的吸收值；A 2——样品溶液的吸收值；
M ——样品量，克或毫升（g 或mL ）。
注：葡萄糖酸氯⼰定含量测定可以⽤醋酸氯⼰定做标准品，并将结果乘以1.4352。盐酸氯⼰定含量测定可以⽤醋酸氯⼰定做标准品，并将结果乘以0.9246。A.3.7 精密度
在重复性条件下获得的两次独⽴测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
图A.1醋酸氯⼰定的⾼效液相⾊谱图
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