维普资讯 http://www.cqvip.com 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３３ 三七总皂甙对脑缺血模型动物的作用 周勇，严国锋，张健，顾德官 （上海交通大学医学院，上海２０００２５） 【摘要】目的通过三七总皂甙（ＰＮＳ）对大鼠和沙鼠脑缺血模型的实验研究，观察ＰＮＳ的疗效。 方法将４７只ＳＤ大鼠随机分为对照组、尼莫地平组、三七治疗组（２００、１００和５０ ｍｇ／ｋｇ组）和 预防组，制备局灶性大脑中动脉梗塞模型。预防组制模前２０ ｍｉｎ内静脉给药，其余各组制模后静 脉给药。观察２４ ｈ后，进行行为指标评分，１１ 染色，求得缺血面积，统计各组差异。３９只沙 鼠进行全脑缺血再灌注模型制备，分组情况与局灶性大脑中动脉梗塞模型相同，预防组预先给药， 其余各组为制模后给药，观察再灌注后１、２、３、４、５和６ ｈ的行为变化，进行评分，统计各组 差异．结果ＰＮＳｆｌＥ降低大鼠局灶性大脑中动脉栓塞模型的卒中指数，能减少该模型的局灶性脑缺 血面积，模型术前预防给药的疗效优于同剂量治疗给药。ＰＮＳ对沙鼠全脑缺血再灌注脑损伤模型 同样能明显降低卒中指数和再灌注后６ ｈ和２４ ｈ内的死亡率。结论ＰＮＳ对脑缺血疾患的临床应 用可能是有益的，为临床进一步的研究提供了一定依据。 【关键词】ＰＮＳ；局灶性脑缺血：沙鼠：脑缺血再灌注：卒中指数：脑缺血面积；死亡率 【中图分类号】Ｑ９５—３３ 【文献标识码】Ｂ 【文章编号】１００４ ８４４８（２００７）０２—０１３３．０４ 三七（ｍ－七）是一味常用的传统中药，其药理 体重５６￣９４ ｇ的普通级沙鼠３９只，雌、雄兼用， 作用广泛，对心脑血管尤其是脑血管的作用 明 由浙江省医学科学院动物中心提供［ＳＣＸＫ（浙）２００３— 显。应用大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血模型和全脑 ０００１】。 缺血再灌注脑损伤性模型，对由三七提纯的三七总 １．３实验方案和步骤 皂甙（ＰＮＳ）的治疗作用进行了研究，企望为该成分 １．３．１局灶性大脑缺血模型 基本参照Ｌｏｎｇａｔ４］和 的临床应用提供实验依据。 Ｌａｉｎｇｔｓ】的方法制备大脑中动脉梗塞模型。人鼠用 ３．５％的水合氯醛按３５０ ｍｇ／ｋｇ作腹腔麻醉。于颈 １材料和方法 部作一约２ ｃｍ切口，分离出右颈总动脉及分支颈 １．１药品与试剂 内、外动脉，结扎颈外动脉，进而分离并结扎颈 三七总皂甙（ＰＮＳ）粉剂由山东鲁抗辰欣药业有 内动脉进耳分支。于颈总动脉（近内、外颈动脉分 限公司提供，使用时于注射用乳化液（德国费森尤 义处）上作一切口，由此沿颈内动脉插入一根头端 斯公司）中制成乳化液。尼莫地平注射液（北京拜尔 加工成圆珠状（直径＜Ｏ．３０ ｍｍ）尼龙棒（４—０号），插入 药业有限公司）。 约１７ ｍｍ（由颈内、外动脉分叉处起算），用缝线同 １．２动物 定尼龙棒。缝合颈部肌肉、皮肤后回笼饲养。 局灶性脑缺血模型取体重２７０￣３５０ ｇ的清洁级 上述实验分为６组：（１）对照组，按每百克体重 雄性ＳＤ大鼠４７只，由中科院上海实验动物中心提 １ ｍｌ生理盐水；（２）尼莫地平组，按２ ｍｇ／ｋｇ；（３）－－－七 ＇供［ＳＣＸＫ（沪）２００３—０００３】。全脑缺血再灌注模型取 总皂甙治疗分成２００、１００和５０ ｍｇ＆ｇ三组：（４）三 七总皂甙预防组：１Ｏ０ ｍｇ／ｋｇ。药液均 电子微鼙 【收稿时间１ ２００７—１ ２－０４ 泵按０、３０ ｍｌ／ｍｉｎ于舌静脉恒速注射。均以每百克体 【作者简介】周 ￣（１９７５－），男，助理实验师。 重１ ｍｌ的等体积用量。预防组于术前２０ ａｒｉｎ注射， Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｋｂｚｙ＠ｓｈｓｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 治疗各组均于尼龙棒插入到位后２０ ｍｉｎ再行注射。 维普资讯 http://www.cqvip.com １３４ 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｕｎ．２００７，２７（２） 手术后２４ ｈ给动物行为指标评分：大脑右侧中 动脉的栓塞，主要引起左侧肢体的病症，本文采用刘 小光［６１、张玉珍［７１等的评分法，根据评分标准，满分 为１１分，分数越高，动物行为障碍越严重。 动物行为评分后取脑，去除嗅球、小脑和低 位脑干，将组织于冰水中浸２ ｍｉｎ，然后水平切４ 刀分成５片【，．８】。第一刀在脑前极与视交叉连线中 表１再灌注后行为障碍评分（卒中指数） 状 毛蓬松、峰 活动减缓、弱 听力下降 闭眼或眼球固定 前肢肌力下降 后肢肌力下降 震颤 单向活动 昏睡 点，第二刀在视交叉部位，第三刀在漏斗柄，第 四刀漏斗柄与脑尾极之间。脑片用四红氮唑（ＴＴＣ） 染色，正常组织经染色后呈红色，因血管梗塞而 缺血的组织呈白色，将每个脑平面（５片１Ｏ面）投射 到密度均一的铝箔上，剪下梗塞面积，以“重量 求面积法”计算缺血组织重占总脑重的百分比作为 梗塞范围的大小。 抽搐、阵挛、翻滚 总分 ２５ （３）三七总皂甙治疗分为１００、５０和２５ ｍｇ／ｋｇ三组， 于双侧颈总动脉再灌注２０ ｍｉｎ时给药；（４）－－＝七总皂 甙预防组为５０ ｍｇ／ｋｇ，于双侧颈总动脉夹闭前２０ ａｉｒｎ 时给药。 １．３．２全脑缺血再灌注模型 由于沙鼠缺乏完整的 ｗｉｌｌｉ’Ｓ环这一特殊性解剖特点，仅结扎双侧颈总动 脉即可造成全脑缺血，手术简便、快捷，为目前 最广泛采用的全脑缺血模型【９・１０１。本实验采用沙鼠 双侧颈总动脉夹闭６０ ｍｉｎ后再灌注模型，观察该 ２结果 ２．１局灶性脑缺血模型 模型造成的大脑损伤后出现的行为障碍。沙鼠用盐 酸氯胺酮１００ ｍｇ／ｋｇ腹腔麻醉。仰卧于手术板上， 颈中线处作一切口，分离双侧颈总动脉，分别用动脉 夹同时夹闭双侧颈总动脉，在夹闭６０ ｍｉｎ时去除 从表２可见，各组大鼠的体重没有明显的差 异。行为评分，以对照组的卒中指数（８．８８±０．８４） 为最高，其它各用药组均显著低于对照组。即尼 莫地平组和三七总皂甙各组用药后对火脑局灶性缺 血后表现的行为症状均有不同程度的改善。但三七 总皂甙治疗的３个剂量组之间没有明显的差异，即 量效关系不明显。从大脑缺血面积比较可见，以 对照组为最大，而以尼莫地平组的为最小。三七 总皂甙治疗和预防各组的缺血面积也均显著小于对 照组。治疗组中２００ ｍｇ／ｋｇ组缺血面积的减少最人。 １００ ｍｇ／ｋｇ组和５０ ｍｇ／ｋｇ组次之，表现一定程度 的量效关系。另外，三七总皂甙预防组（１００ ｍｇ／ｋｇ） 双侧动脉夹，使颈总动脉再灌注。观察每只沙鼠 再灌注后１、２、３、４、５和６ ｈ后的行为变 化并记录评分，也记录６ ｈ内和２４ ｈ内的死亡率。 全脑缺血再灌注后行为障碍评定卒中指数是评 判大脑损伤程度的重要依据。目前大多采用２５分评 分法【３－，１，本文也采用这一方法。但对少数项目的 称谓或计分数稍作改动，以便适合于本实验条件下的 实际评定卒中指数。具体列于表１加以说明。 实验药液均由股静脉按５ ｍｌ／ｋｇ体重等体积和 １ ｍｌ／ｍｉｎ的速度给予。沙鼠分为６组：（１）对照组：按 的作用，则要明显好于同剂量治疗组，其疗效与 治疗组２００ ｍｇ／ｋｇ相当。 每百克体重０．５ ｍｌ生理水；（２）尼莫地平组：１ ｍｇ／ｋｇ； 表２三七总皂甙对大脑中动脉栓塞局灶性缺血模型的作用 注：１．与对照组比较，・Ｐ＜０．０５，¨Ｐ＜０．０１；与尼莫地平组比， Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１； 三七各组与２００ ｍｇ／ｋｇｇｌ￣，★Ｐ＜０．０５；三七预防组与同剂量治疗组比，”Ｐ＜０．０１； ２．三七预防组ｎ－－７，其余各组ｎ＝８ 维普资讯 http://www.cqvip.com 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３５ ２．２全脑缺血再灌注模型 各组６ ｈ和２４ ｈ内的死亡率列于表５，比较 显示对照组为最高（７ ｌ％），尼莫地平组死亡率为 零。三七总皂甙治疗组则以１００ ｍｇ／ｋｇ组２４ ｈ内 再灌注３ ｈ各组的行为评分均较明显低于对照 组，尤以三七总皂甙１００ ｍｇ／ｋｇ组为最低（表３）。 表４为三七总皂甙对沙鼠全脑缺血６０ ｍｉｎ后再 死亡率为最低（１４％），预防组为（５７％）。 灌注６ ｈ内的影响，即汇集各组每小时内沙鼠行为 评分的均值，加以统计分析。结果说明，尼莫地平 ３讨论 组的行为评分指数显著低于对照组的１５．６７±１．７５， 疗效十分显著。三七总皂甙各组的行为评分指数均 应用中动脉栓塞造成局灶性缺血实验的技术要 显著低于对照组。尤以１００ ｍｇ／ｋｇ组的４．３３±２．９４ 求严格，除了动物的来源、规格一致ｔ＇ｏｌ￣，ｌ－，还须 为最低，而５０ ｍｇ＆ｇ组又比２５ ｍｇ＆ｇ组明显为低。 保持一定的室温。取脑时必须检查尼龙棒球珠端到 位是否准确。本实验的对照组脑缺血面积平均为 表３三七总皂甙对沙鼠全脑缺血６１１ ａｒｉｎ再灌注３ ｈ卒中指数 ３０％，尼莫地平治疗后能减少缺血面积５０％，这 一结果类似于此前的报告【７］。 三七总皂甙对脑缺血模型的作用，无论从卒中指数 减低或是对缺血面积减少看均有明显的疗效，且与 后者呈一定的量效关系。这可能由缺血面积反映到 行为障碍的症状，表现有一定的个体差异所致。 注：与对照组比， 尸≮０．０５，＋ ｜Ｐ ０．０ｌ；与尼莫地平组比， 对全脑缺血再灌注后行为障碍计分是评判脑损 Ｐ＜Ｏ．０ｌ；三七１００ｍｇ，Ｉ【ｇ组与５０ｍｇ，Ｉ【ｇ组比， Ｐ＜０．０５；预防 伤程度的重要依据。由于脑缺血时间长短不同， 组与治疗１００ ｍｇ，Ｉ【ｇ组比， ０．０５ 对脑损伤的程度也不一样，以致呈现的症状也有一 表４三七总皂甙对沙鼠全脑缺血６０ ｍｉｎ再灌注６ ｈ内的卒中指数 注：与对照组比，¨Ｐ＜０．０１；与尼莫地平组比， Ｐ＜０．０５；与三七ｌｏｏｍｇ 组比， 尸ｌ＜０．０５，★ 尸《０．ＯＩ；与三七预防组比， ．０５ 表５各组沙鼠再灌注６ ｈ和２４ ｈ内死亡率 定的差异。经预实验，选取全脑缺血６０ ｍｉｎ，沙 阵挛、翻滚这一症状的沙鼠大多数于２４ ｈ内死亡， 鼠的各种行为障碍明显，大多数沙鼠又不会在短时间 是极为严重的病症，所以列最高评分为‘６’。 内死亡，便于实验观察。本文采用２５分评分法，仅 全脑缺血实验中选取３ ｈ时的行为评分作叙 对少数项目的称谓和评分稍作改动Ｉ ’９】，使其更适合 述，这是由于再灌注后１ ｈ或２ ｈ有个别动物尚未 本实验条件下的观察。如实验观察到凡出现抽搐、 完全清醒，资料不够完全。结果表明三七总皂甙 维普资讯 http://www.cqvip.com １３６ 实验动物与比较医学Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｕｎ．２００７，２７（２） 对沙鼠全脑缺血６０ ｍｉｎ后再灌注模型的行为障碍疗 效有着明显的量效关系，即剂量越大疗效越显著。 三七总皂甙预防组虽也显示出疗效，但其疗效均不 及治疗各组明显。 南京医学院学报，ｌ９９２，ｌ２（３）：２３７－２３９． 【３】李麟仙，王予灿，黄志宏，等．三七皂甙对急性脑缺ＪｆｌＬ的保 护作用［Ｊ］．Ｉ１１＿国药理学通报，ｌ９９ｌ，７（１）：５６． ［４】Ｌｏｎｇａ ＥＺ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ ＰＲ，Ｃａｒｌｓｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃｒａｎｉｏｔｏｍｙ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｓｔｒｏｋｅ，ｌ ９８９，２０（１）：８４－９ １． 三七总皂甙于大脑局灶性缺血模型中预防性给 药疗效优于同剂量治疗性给药，这在临床防病中有 其实际意义。而在全脑缺血模型中预防给药并不优 于治疗性给药。该模型临床上仅在心肌骤停时出 现，预防给药的实际可能性不大。 经大脑局灶性缺血和全脑缺血再灌注两种模型 的实验，结果显示三七总皂甙的治疗作用明确， 可减少模型缺血面积，能降低脑损伤后出现的卒中 指数，这在临床上有其实际应用的价值。 【参考文献】 …赵馥，胡世荛，杨世萍．血栓通注射液治疗脑血管病的临 床实验研究［Ｊ］．广东医学，ｌ ９８５，６（８）：３０－３２． ［２】潘鑫鑫，刘天培．人参总皂苷对急性脑缺ＪｆｌＬ的保护作用［Ｊ］． ［５５］ Ｌａｉｎｇ ＩＬｌ，Ｊａｋｕｂｏｗｓｋｉ Ｊ，Ｌａｉｎｇ ＲＷ．Ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｔｒｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃｒａｎｉｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ａｔｓ．Ｗｈｉｒｃｈ ｍｅｔｈｏｄ ｗｏｒｋｓ ｂｅｓｔ［Ｊ］？Ｓｔｒｏｋｅ，ｌ ９９３，２４（２）：２９４－２９８． ［６】刘小光，冯亦璞．丁苯酞对局部脑缺ＪｆｌＬ大鼠行为和病理改 变的保护作用［Ｊ］．药学学报，ｌ ９９５，３０：８９６． ［７】张玉珍，顾德官，茅守玉，等．银杏叶提取物（ＥＧｂ）对大鼠局 部脑缺ＪｆｌＬ及颈动脉ＪｆｌＬ栓形成的保护作用［Ｊ】．药学学报， ｌ９９８，３３（１２）：９０１． ［８】Ｌｕｎｄｙ ＥＦ，Ｓｏｌｉｋ ＢＳ，Ｆｒａｎｋ ＲＳ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｉｏｎｅａｌ ｂｒａｉｎ ｓｏｄｉｕｍ， ｐｏｔａｓｓｕｍ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｓ ａｎｄ ｇｅｒｂｉｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１ ９８６，ｌ ６：２０ １－２ １ ４． ［９ 徐叔云，卞如濂．药理实验方法学［９］Ｍ】．北京：人民 卫生出 版社．１９８５．１０６２． ［１ ｏ］刘 璇，朱兴族．药物筛选中脑缺ＪｆｌＬ模型的应用［Ｊ】． Ｉ－国药 理学通报．１９９８，ｌ４（５）：３９９－４０１． ｝木木木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木｝木 （上接第１２７页） ［３】Ｄａｖｉｅｓ Ｐ，Ｍａｌｏｎｅｙ ＡＪ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｌｏｓｓ ｏｆｃｅｎｔｒａｌ ｃｈｏｌｏｎｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’Ｓｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ａｎｃＬｅｔ，ｌ９７６，ｉｉ：１４０３．１４０７． 了变化，而使ＡＣｈＥ的酶活性升高【７】，ＡＣｈＥ活性升高 又对ＡＩ３的构像起了作用，使其更易聚集【ｓ】。双表达 转基因小鼠模型在行为学以及它在ＡＤ病中有关作 用机理方面的研究将有待进一步研究。 【参考文献】 ［１】Ｚａｒｒｉｌｌｉ Ｒ，Ｃｒｉｓｐｉｎｏ Ｍ，Ｂａｇａｔｔｉｎｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌｒａ ｅｐｉｄｅｍｉ． ｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｏｕｔｂｒｅａｋｓ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ ｉｎ ｎｉｌ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃａｒｅ ｕｎｉｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ［４】黑爱莲，蔡剑平．阿尔茨海默病动物模型的概况［Ｊ］．中国 神经免疫学和神经病学杂志，２００５，ｌ２：２２３－２２５． ［５】 Ｕｌｒｉｃｈ Ｊ，Ｍｅｉｅｒ—Ｒｕｇｅ Ｗ，Ｐｒｏｂｓｔ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ： ｓｔａｉｎｉｎｇ ｆｏｒ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ ａｎｄ Ａ４ ｐｒｏｔｅｉｎ：ａ ｃｏｍｐａｒａ－ ｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｎｉ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ａｎｄ ｅｎｔｏｒｈｉｎａｌ ｃｏｒｔｅｘ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，ｌ ９９０，８０：６２４－６２８． ［６ 金其煌，张学军．６］乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）￣１］Ｄ淀粉样肽（ＡＤ） 的相互关系［Ｊ］．生命科学，２００４，ｌ６（１）：ｌ１。ｌ５． ［７】Ｍａｒｋ ＲＪ，Ｐａｎｇ Ｚ，Ｇｅｄｄｅｓ ＪＷ，ｅｔ ａ１．Ａｍｙｌｏｉｄ ｂｅｔａ－ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｍｐａｉｒｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ａｎｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ：ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆｍｅｍｂｒａｎｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，ｌ ９９７，ｌ ７：ｌ ０４６一ｌ ０５４． ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］－Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，４２（３）：９４６－９５３． ［２ Ａｌ２］ｔｅｒ ＭＪ，Ｃｏｒｏｎｅｌ Ｃ，Ｓｈｅｌｔｏｎ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓ． ｓｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｉｎ ＳｅＲｅｓ． ［８】Ｐｅｒｅｉｒａ Ｃ，Ｓａｎｔｏｓ ＭＳ，Ｏｌｉｖｅｉａ ｒＣ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｒｇｙ ｍｅｔｅａｂｏｌｉｓｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅｄｆｉｂｒｏｂｌｓｔａｓ［Ｊ］．ＰｒｃＮａｔｏｌＡｃａｄ ＳｃｉＵＳＡ，ｌ９９１． ８８：１６－２Ｏ． ｇ１３ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ ＰＣ ｌ ２ ｃｅｌｌｓ：ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ［Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ，ｌ ９９９，６（３）：２０９－２ ｌ ９．