实验中医药学＿…………………………一一Ｔ＆Ｍ ≯ ２０１４年屠ｌｌ爹隐学诼 第１５卷第３期 实验中医药学 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ＴＣＭ “实验”虽然是现代科学研究常用的方法，然在我 国却自古有之。古代学者王冲说“等类众多，行事比 肩，略举较著，以定实验也”，颜之推说“昔在江南，不 信有千人氇帐，及来河北，不信有二万斛船，皆实验 也”，大凡此义均与现代科学意义上的ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ相 通。照此，传统中医药学并非只是经验之学，而更充满 实验的思想和方法。实验中医药学，将现代实验科学 的方法和传统中医药学的实验方法融合起来，开拓现 代实验生物学、医学和药物科学的新领域。 三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠的保护作用 黄玉霞 （安徽中医药大学第一附属医院，国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽合肥２３００３１） 摘要目的：研究三七总皂苷（ＰＮＳ）对急性化学性肝损伤小鼠的保护作用。方法：昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、 ＰＮＳ（１００ ｍｇ／ｋｇ，２００ ｍｇ／ｋｇ，４００ ｍｇ／ｋｇ）．￣Ｋ和联苯双酯（ＢＰ，１５０ ｍ ｋｇ）组。给药组分别灌胃相应的受试药物，正常组和模 型组给予等量溶媒，每天１次，连续１０ ｄ。第１０天经腹腔注射０．１％四氯化碳（ＣＣｈ，ｔＯ ｍｌ／ｋｇ）诱发急性化学性肝损伤小 鼠模型 ．比色法测定血清中丙氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）和肝匀浆中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙 二醛（ＭＤＡ）、羟脯氨酸（Ｈｙｐ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）的含量。取固定部位肝脏组织，ＨＥ染色观察肝组织病理损伤程度，免疫组 织化学法检测肝组织肿瘤坏死因子蛋白（ＴＮＦ—Ｏｒ．）的表达。结果：与模型组相比，三七总皂苷（２００ ｍｇ／ｋｇ，４００ ｍｇ／ｋｇ）不仅 可减轻肝组织损伤程度，降低ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＭＤＡ和Ｈｙｐ含量，升高ＳＯＤ、ＧＳＨ的水平，还可抑制肝组织中ＴＮＦ一０【的表达。 结论：ＰＮＳ对急性化学性肝损伤小鼠具有一定保护作用。 关键词三七总皂苷；四氯化碳；肝损伤；小鼠 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－０２５８（２０１４）０３—００１１－０４ 七义名田七、人参三七，为五加科人参属植 物，主产于云南、广西及四川等地，具有化瘀止血、消 肿止痛的功能…。 七总皂苷（ＰＮＳ）是三七主要有效 １．１．１ 实验动物昆明种小鼠，雄性，体重１８ ｇ～２２ ｇ， 由安徽医科大学实验动物中心提供（皖动准字号０２ 号），自由饮水、进食。 １．１．２试药与仪器三七总皂苷，淡黄色无定形粉末， 规格＞９５％，南京泽朗医药科技有限公司；联苯双酯 （ＢＰ），北京协和制药厂；四氯化碳（ＣＣ１ ），汕头市西陇 成分，具有广泛的生物学活性。本实验以四氯化碳诱 导急性化学性肝损伤小鼠为模型，观察 七总皂苷 的保肝护肝作用，以期为其开发利用提供进一步的 科学依据。 １材料与方法 １．１ 实验材料 化＿Ｔ厂；丙氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸氨基转移 酶（ＡＳＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、羟 脯氨酸（Ｈｙｐ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）试剂盒，南京建成生 物工程研究所；兔抗鼠肿瘤坏死因子（ＴＮＦ一 ）单克 ［基金项目］闷家【ｆＩ医药霞点学科临床中药学建设项目｛国中医药人教发［２０１２］３２号】 ［作者简介］黄玉霞，主管巾药师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｈａｎｂｉｎｇ＠１６３．ｅｏｍ Ｉｌｌ，＇ 瘁屠ｌＩ爹阮学诼硎２０Ｉ４ Ｖｎ１．１５ Ｎ（’．３ －实验中医药学 清Ａ 、ＡＳＴ含量虽较模型组降低，但差异无统计学 意义，结果见表ｌ。 表ｌ三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠血清＾ｌ 『＇ＡＳＴ的影响（Ｕ／Ｉ ， ） 隆抗体、ＤＡＢ显色试剂，河北博海生物Ｔ程开发有 限公司分装（美同Ｓａｎｔａｃｒｕｚ公司）。ＧＬ一２０Ａ全自动 冷冻高速离心机，湖南仪器仪表总厂离心机厂； ＭＡＵＯ型电子分析天平，上海第二天平仪器厂； ８４５３Ｅ紫外分光光度计，美同安捷伦公司；电子显微 镜ＸＤＳ—ｌＢ，重庆光电仪器总公司。 １．２实验方法 Ｉ－２＿１ 分组与模型建立昆明种小鼠，适应性饲养１ Ｗ ： 正常组比较．”Ｐ＜Ｏ．Ｏ１； ｉ模型绀比较， Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１ 后，随机分为正常组、模型组、 七总皂苷（１００ ｍｇ／ｋｇ， ２００ ｍｇ／ｋｇ，４００ ｍｇ／ｋｇ）组、联苯双酯（１５０ ｍ ｋｇ）组， ２．２三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠肝组织 病理学的影响 每组ｌＯ只。各治疗组灌胃给予相应药物，正常组和 模型组给予等容积溶媒，每天１次，连续１０ ｄ。于末 光镜下可见，正常组小鼠肝结构完整，轮廓清 次给药后ｌ ｈ，按１０ ｍＬ／ｋｇ腹腔注射０．１％ＣＣＩ 橄 榄油溶液复制急性化学性肝损伤动物模型，正常组 腹腔注射等容量的橄榄油溶液 。。 晰，肝细胞排列整齐，大小均匀，分界清楚，无炎细胞 浸润；模型组小鼠肝内细胞…现窄泡受性、肝细胞肿 胀较明显，巾央静脉周同有少量肝细胞坏死和炎症 细胞浸润； 七总皂苷各剂量组可减轻组织病变范 同与程度，炎细胞浸润减少，结果见网ｌ。 １．２．２血清Ａ 、ＡＳＴ的检测 注射０．１％ＣＣ１ 橄 榄油溶液１６ ｈ后，自小鼠有眼眶静脉丛采Ｉｎｌ－，常规 分离血清，采用比色法测定ＡＬＴ、ＡＳＴ含量，具体操 作按说明书进行。 １．２．３肝组织病理学检查取肝脏相同部位组织同 定于１０％巾性甲醛溶液中，ＨＥ染色，光镜下观察肝 脏病理组织学改变。 １．２．４肝组织ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ、Ｈｙｐ检测精确称 正常组 取肝组织０．３０ ｇ，用冰，卜理盐水制成Ｉｏ％ｆ１９肝匀浆， 测定肝组织中ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ、Ｈｙｐ含量，具体操作 按说明书进行。 １．２．５免疫组化技术测定肝脏ＴＮＦ 蛋白表达采用 柠檬酸钠缓冲液热抗原修复，ＳＰ法免疫组织化学染 色，川ＤＡＢ／Ｈ Ｏ：显色，苏小精复染。具体操作按试 剂盒说明书，用已知阳性切片作为阳性对照，用ＰＢＳ 代替一抗作为阴性对照。 １．３统计学方法 采刖ＳＰＳＳ １ ３．０统计软件进行数据分析，各组数 据均以均数±标准差（ ）表示，组问比较采用ｔ检 验，Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５均具有统计学意义。 ２结果 ■Ｌ总电千｝＝（１００ ｍｇ／ｋｇ）ｌｉ－ｌ Ｌ总Ｉ皂仟（４００ ｍｇ／ｋｇ）组 联摧双脂（１５０ Ｉｌ１ ｋｇ）ｆｉｔ ２．１ 三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠血清 ＡＬＴ、ＡＳＴ的影响 图ｉ三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠肝组织病理学的影响（ＨＥｘＩＯ０） 与正常组相比，模型组小鼠血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平 ２＿３三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠肝组织 ＭＤＡ、ＳＯＤ的影响 升高，差异有统计学意义；与模型组相比， 七总皂苷 中、高剂量组和联苯双酯组小鼠ｍ清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平 显著降低（Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ，Ｐ＜Ｏ．０５）， 七总皂苷低剂量组 与正常组相比，模型组小鼠肝组织ＭＤＡ水平 显著升高，ＳＯＤ水平 著下降；与模型组相比， 七 实验中医药学 露 ” 瘁陪 沉学诼 …………………………一一 ２０１４年第１５卷第３期 减少骨质疏松症骨折并发症的发生而发挥治疗作用。 鼠骨密度、胫骨最大应力和最大抗弯强度而起到抗 通过本实验研究发现壮骨止痛方能增加去势雌 骨质疏松的作用。 参考文献 ［１］朱建民，程秦娣．绝经后骨质疏松症［Ｊ＿＿中华内分泌代谢杂志，２００６，１２（４）：２３４－２３６． ［２］张国民，莫新民．壮骨止痛方全方提取物对去势雌鼠基质金属蛋白酶２的影响［Ｊ］．中国中医基础Ｉ丢学杂志，２０１０，１６（１１）：１ ０１０—１ ０１２． ［３］朱蕾，赵小英，卢兴国．去卵巢大鼠骨密度变化与骨髓组织血管生成的关系［Ｊ］．中国病理生理杂志，２００９，２５（９）：１ ８０１—１ ８０５． ［４］Ｈａｖａｓｈｉ Ｋ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｍ，Ｍｕｒａｋａｗａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｅ ｆｒａｇｉｌｉｔｙ ｉｎ ｍａｌｅ ｇｌｕｅｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｉｓ ｎｏｔ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｂｏｎｅ ｍｉｎｅｒａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ［Ｊｊ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ Ｉｎｔ，２００９，２０（１１）：１ ８８９—１ ８９４． ［５］董梅，齐宝庆．骨质疏松症的药物治疗进展［Ｊ］．内科，２００９，４（１）：９８—１０１． （编辑：翟春涛） （上接第１３页）量明显减少，提示ＰＮＳ能抑制由 有一定的保护作用，其机制可能与清除肝组织中 ＴＮＦ－－ａ所介导的肝细胞炎Ｉ生反应，从而发挥保护作用。 的自由基、抗脂质过氧化和抑制ＴＮＦ—ｏＬ的表达等 综上，三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠具 有关。 参考文献 ［１］刘辰，郑惠珍．三七总皂苷的研究进展［Ｊ］．中国医药指南，２０１２，１０（１６）：７１—７４． ［２］景金柱，崔哲，张秀梅，等．河蚬提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用［Ｊ］．中国药业，２００９，１８（１）：６－７． ［３］韩燕全，洪燕，左冬，等．重楼对小鼠急性肝损伤保护作用的研究［Ｊ］．中药药理与１临床，２０１２，２８（１）：９９—１０２． ［４］董丽萍，于锋，柳静，等．异甘草酸镁对Ｄ一氨基半乳糖急ｃ生肝损伤模型小鼠的保护作用研究［Ｊ］．中国药房，２００６，１７（１２）：９０２—９０４． ［５］叶丽红，赵冬耕，俞晶华，等．补精复方对大鼠化学性肝损伤的保护作用与机制探讨［Ｊ］．新中医，２０１０，４２（９）：１０６—１０８． ［６］邹金发，刘晓光，齐凤杰，等．葡萄籽原花青素减轻小鼠急性化学性肝损伤［Ｊ１＿基础医学与临床，２０１２，３２（１０）：１ １９８—１ ２０１． ［７］向维，陈松华．彩虹明樱蛤多糖对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用［Ｊ］．中国生化药物杂志，２０１２，３３（１）：４３－４５． ［８］陈方军，李俊，王佳佳．玉屏风多糖对小鼠化学性肝损伤的影响［Ｊ］＿安徽医科大学学报，２０１１，４６（１）：４９—５２． ［９］章道华，程昊，熊玉，等．异甘草素对大鼠急性化学性肝损伤的保护作用［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００８，２８（７）：５１１－５１４． ［１Ｏ］李秀萍，孙树凯，魏军，等．白花蛇舌草对肝损伤小鼠Ｔ细胞亚群、ＴＮＦ—ｄ和ＩＬ一６的影响［Ｊ］．宁夏Ｉ丢学杂志，２０１０，３２（６）：４９５—４９７． ［１１］杨林林，魏全嘉，李福安，等．羌活水煎液对药物性急性肝损伤ＴＮＦ— 、ＩＬ＿６、Ａ 水平的影响［－１］．山西医药杂志，２００９，３８（１１）：１ Ｏｌ１－１ ０１２． ［１２］陈培波，刘伟萍，王彦平，等．山药水提物对化学性肝损伤的保护作用［Ｊ］．现代预防医学，２００９，３６（１８）：３ ４３７—３ ４４０． （编辑：翟春涛） Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｎ ａｃｕｔｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｍｉｃｅ ＨｕａｎｇＹｕｘｉａ （Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＡｎｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｒａｄｅ ３ Ｌａｂｏｒｔａｏｒｙ ｏｆＴＣＭ Ｐｒｅｐａｒｔａｉｏｎ，Ｓｔａｔｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒｔａｉｏｎ ｆｏＴＣＭ，Ｈｅ／ｅｉＡｎｈｕｉ ２３００３１） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｓａｐｏｎｉｎｓ（ＰＮＳ）ｏｎ ａｃｕｔｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＰＮＳ（１００ ｍｇ，ｌ（ｇ，２００ ｍｇ／ｋｇ，４００ ｍｇ／ｋｇ） ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ＢＰ（１５０ ｍｇ／ｋｇ）ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｂｙ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｔｈｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎｃｅ ａ ｄａｙ．１０ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ａｃｕｔｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｅｓ— ｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｖ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＡＩＪＴ，ＡＳＴ，ＳＯＤ，ＭＤＡ，Ｈｙｐ ａｎｄ ＧＳＨ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｖ ｃｈｒｏｍａｔｏｍｅｔｒｙ．Ｌｉｖｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ＨＥ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ一仅ｂｙ ｉｍｍｕｎｉｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＰＮＳ（２００ ｍｇ／ｋｇ，４００ ｍｇ／ｋｇ）ｇｒｏｕｐｓ ａｌｌｅｖｉａｔ— ｅｄ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＭＤＡ ａｎｄ Ｈｙｐ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＳＯＤ ａｎｄ ＧＳＨ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ— ｉｎ １ｉｖｅｒ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＮＳ ｈａｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ａｃｕｔｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｍｉｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｓａｐｏｎｉｎｓ；ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ；ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ；ｍｉｃｅ